Evaluation of different extenders for cold storage of meagre (Argyrosomus regius) semen

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina VeterináriaSemen refrigeration is usually recommended as a cheap and simple procedure that facilitates artificial reproduction techniques. The main objective of this experiment was to develop a semen refrigeration protocol for meagre that is considered a potential candidate for aquaculture diversification in Southern Europe. This thesis also contributes for the understanding of the causes of the fish sperm quality degradation during refrigeration. Three extenders (non-activating medium (Fauvel et al., 1998); NaCl 0.9% and; NaCl 0.9% with glycine and glucose) and three different dilutions (1:4, 1:9 and 1:19, sperm:extender) were tested in a full factorial design. The following quality parameters were assessed along the storage time: sperm motility parameters; percentage of viable sperm; adenosine triphosphate (ATP); lipid peroxidation in the form of malondialdehyde (MDA); and bacteriology. The 0.9% NaCl and the 0.9% NaCl with glycine and glucose extenders and the dilutions 1:4 and 1:9 kept a higher percentage of motile cells for longer, as well as higher sperm velocity. Sperm viability and ATP had better results with 0.9% NaCl and the 0.9% NaCl with glycine and glucose extenders. The MDA values were lower in treatments with dilution 1:4 when compared to those with dilution 1:9. In the CFU/ml values, no differences were found between extenders and dilutions. Motility parameters were strongly correlated with viability, whereas no or weak correlations existed with the remaining parameters. Thus, motility and viability seem to have the most impact in the loss of semen quality. According to the results, meagre semen could be kept refrigerated using 0.9% NaCl, in dilution 1:4, for up to 10 days.RESUMO - AVALIAÇÃO DE DIFERENTES DILUIDORES PARA A REFRIGERAÇÃO DE SÉMEN DE CORVINA (ARGYROSOMUS REGIUS) - A refrigeração de sémen é tipicamente recomendada como um procedimento barato e simples que facilita as técnicas de reprodução artificial. O principal objectivo desta experiência foi desenvolver um protocolo de refrigeração de sémen para a corvina, que é considerada uma potencial candidata para a diversificação de aquacultura no sul da Europa. Esta tese contribui também para a compreensão das causas da degradação da qualidade de sémen de peixe durante a refrigeração. Três diluidores (non-activating medium (Fauvel et al., 1998); NaCl 0,9%; e NaCl 0,9% com glicina e glucose) em três diferentes diluições (1:4, 1:9 e 1:19, sémen:diluidor) foram testados num plano factorial completo. Os seguintes parâmetros de qualidade espermática foram avaliados ao longo do tempo de armazenamento: parâmetros de mobilidade do sémen; percentagem de espermatozoides viáveis; adenosina trifosfato (ATP); peroxidação lipídica na forma de malondialdeído (MDA); e bacteriologia. Os diluidores NaCl 0,9% e NaCl 0,9% com glicina e glucose e as diluições 1:4 e 1:9 mantiveram uma percentagem de células móveis mais elevada por mais tempo, bem como maior velocidade dos espermatozóides. A viabilidade e o ATP tiveram melhores resultados com NaCl 0,9% e NaCl 0,9% com glicina e glucose. Os valores de MDA foram mais baixos em tratamentos com as diluições 1:4, quando comparados com aqueles com as diluições 1:9. Nos valores de bacteriologia não foram encontradas diferenças entre diluidores e diluições testadas. Os parâmetros de mobilidade correlacionaram-se fortemente com a viabilidade, enquanto inexistentes ou fracas correlações foram encontradas entre os restantes parâmetros. Por conseguinte, mobilidade e viabilidade parecem ter o maior impacto na perda de qualidade do sémen. De acordo com os resultados, o sémen de corvina pode ser mantido refrigerado usando o diluidor NaCl 0,9% na diluição 1:4 até 10 dias.N/