Implicações da redução na concentração de gema de ovo no meio glicina-gema-leite sobre a cinética, morfologia e integridade de membranas espermáticas em sêmen ovino criopreservado

This study was conducted to determine the effects of reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-yolk-milk (GGL), using four Santa Ines rams and four Dorper rams. Four ejaculates per ram were obtained by artificial vagina. After the macro and microscopic evaluation the semen was kept at 32oC and diluted to achieve concentrations up to 400 x 106 spermatozoa/mL in the extender containing 20 % (GGL20), 15 % (GGL15), 10 % (GGL10) or 5 % (GGL5) (v/v) of egg yolk, and packaged in 0.25 mL straws (IMV, France), cooled and frozen in automated control system. Thawing was performed in a water bath at 40oC/20 seconds. Sperm kinetics was determined in computer-assisted semen analysis (CASA). Morphology of spermatozoa were observed using a wet preparation examined under phasecontrast microscopy and the integrity of sperm membranes was verified by the combination of the probes fluorochromes carboxyfluorescein diacetate (DIC) and propidium iodide (IP), under fluorescence microscopy. The total sperm motility (MT) and progressive motility (MP) in treatments, GGL10 and GGL5 were higher (P<0.05) than in GGL20. Semen cryopreserved in both extender, GGL10 and GGL5 had the highest percentage of sperm with intact membranes than in GGL20 (P<0.05). In conclusion, it is possible to reduce the proportion of egg yolk in extender Glycine-yolk-milk up to 5 % (v/v) without alteration on the qualitative and quantitative parameters of cryopreserved ovine semen.Este estudio se realizó para determinar los efectos de la reducción del porcentage de yema de huevo en el diluyente Glicina-Yema-Leche (GYL), con cuatro carneros de la raza Santa Inés y cuatro de la raza Dorper. Cuatro eyaculados de cada carnero fueron colectados por la vagina artificial. Después de evaluaciones macro y microscópicas, el semen fue mantenido a 32 º C y diluido hasta alcanzar la concentración de 400 x 106 espermatozoides/mL en diluyentes conteniendo 20 % (GYL 20), 15 % (GYL 15), 10 % (GYL 10) o 5 % (GYL 5) (v/v) de yema de huevo, y embotellado en pajuelas de 0,25 mL (IMV, Francia), refrigerados y congelados en el sistema con control automatizado. La descongelación fue hecha en baño maría a 40oC/20 segundos. La cinética espermática fue determinada en el sistema computarizado de análisis de semen (CASA). La morfología espermática se evaluó en microscopio de contraste de fase por medio de preparación húmeda y la integridad de las membranas espermáticas observada por la combinación de fluorocromos diacetato de carboxifluoresceina (DIC) y yoduro de propidio (YP), en la microscopía de fluorescencia. Las motilidades espermáticas total (MT) y progresiva (MP) en los tratamientos GYL10 y GYL5 fueron mayores (P<0,05) de que en GYL20. El semen criopreservado en los diluyentes GYL10 y GYL5 presentó mayor porcentaje de espermatozoides con membranas intactas que en el diluyente GYL20 (P<0,05). En conclusión, es posible reducir la proporción de la yema de huevo del diluyente de GlicinaYema-Leche hasta en 5 % (v/v) sin cambiar los parámetros cualitativos y cuantitativos del semen ovino criopreservado.Este estudo foi conduzido para determinar os efeitos da redução na proporção da gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite (GGL), utilizando-se quatro reprodutores da raça Santa Inês e quatro da raça Dorper. Quatro ejaculados por reprodutor foram colhidos com vagina artificial. Após as avaliações macro e microscópicas, o sêmen foi mantido a 32oC e diluído para atingir-se concentração de 400 x 106 espermatozóides/mL nos meios contendo 20 % (GGL20), 15 % (GGL15), 10 % (GGL10) ou 5 % (GGL5) (v/v) de gema de ovo, e então envasado em palhetas de 0,25 mL (IMV, France), refrigerado e congelado em sistema com controle automatizado. A descongelação foi feita em banho-maria à 40oC/20 segundos. A cinética espermática foi determinada em sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA). A morfologia espermática avaliada em microscopia de contraste de fase por meio de preparações úmidas e a integridade de membranas espermáticas verificada pela combinação dos fluorocromos diacetato de carboxifluoresceína (DIC) e iodeto de propídio (IP), em microscopia de epifluorescência. As motilidades espermáticas total (MT) e progressiva (MP) nos tratamentos GGL10 e GGL5 foram maiores (P<0,05) do que no GGL20. O sêmen criopreservado nos meios GGL10 e GGL5 apresentou maior percentual de espermatozóides com membranas íntegras do que no meio GGL20 (P