Criopreservação of semen human being : comparison between method of congelation and types of plants

This research has as objective determines the best freezing method and storage of human semen, when compared the fast method with the slow method and the storage in 0,25ml straws with cryotubes of 2ml, using as variables the morphology and motility of the spermatozoa before and after the cryopreservation. It is an experimental study, laboratorial technique validation. It was developed in the Assisted Reproduction Center of Ceará. Eighteen semen samples from eighteen men were analyzed. The samples were submitted to the analysis of the morphology and motility previous the cryopreservation. It was still determined a spermatozoa motility curve in the first three hours. TEST-YOLK was used as cryoprotective media. After having added the TEST-YOLK media, the semen was divided in same parts and storage in cryotubes and straws. Half of the cryotubes and of the straws was cryopreserved by the fast method (RT and RP, respectively) and the other half by the slow method (LT and LP, respectively). The samples were thawed and analyzed the morphologies, as well as the motilities soon after the thawed and every hour for three hours. Statistical analysis was done by the SPSS program - Windows version 11.0.0. Motility of spermatozoa decrease after the cryopreservation, initial motility was 58,1% and motilities in the different treatments were 30,3% (LT), 21,1% (LP), 27% (RT) and 19,2% (RP). There was a significant decrease of the normal morphology after the cryopreservation, in relation to the initial morphology, but difference was not observed among the methods (RP=12,8%, RT=12,6%, LP=12,6% e LT=12,4%). The motility of LT method was closer than that obtained in the fresh semen. The method LT showed the best recovery of motile cells after freezing and thawing. There was not difference among the methods when appraised the morphology. Key-Word: Cryopreservation; Semen preservation; Spermatozoa; Reproduction.O presente trabalho tem como objetivo determinar o melhor método de congelação e envase de sêmen humano, quando comparado o método rápido com o lento e o envase em palhetas de 0,25ml com criotubos de 2ml, utilizando como variáveis a morfologia e motilidade dos espermatozóides antes e após a criopreservação. Trata-se de um estudo experimental, de validação de técnica laboratorial. Foi desenvolvido no Centro de Reprodução Assistida do Ceará. Foram analisadas dezoito amostras de sêmen de dezoito voluntários. As amostras foram submetidas à análise da morfologia e motilidade espermática prévia à criopreservação. Foi determinada ainda uma curva de motilidade espermática nas primeiras três horas. O meio TEST-YOLK foi utilizado como crioprotetor. Depois de adicionado o crioprotetor, o sêmen foi dividido em partes iguais e envasado em criotubos e palhetas. Metade dos criotubos e das palhetas foi submetida a criopreservação pelo método rápido (RT e RP, respectivamente) e a outra metade pelo método lento (LT e LP, respectivamente). Em seguida, as amostras foram descongeladas e determinadas as morfologias, bem como as motilidades logo após a descongelação e a cada hora durante três horas. Análise estatística foi realizada pelo programa de SPSS for Windows versão 11.0.0. Houve uma queda, estatisticamente significante, da motilidade após a criopreservação, motilidade inicial de 58,1% e motilidades nos diferentes tratamentos de 30,3% (LT), 21,1% (LP), 27% (RT) e 19,2% (RP). Também houve uma diminuição significante da morfologia normal após a criopreservação, em relação à morfologia inicial (14,2%), mas não foi observada diferença entre os métodos (12,8%, 12,6%, 12,6% e 12,4%; RP, RT, LP e LT, respectivamente). O método LT foi o que obteve uma curva de motilidade espermática mais próxima da observada no sêmen in natura. Conclui-se que o método LT foi o que menos afetou a motilidade espermática e que, apesar de ter sido observada uma piora significativa da morfologia espermática após a criopreservação, não houve diferença entre os métodos. Palavras-chaves: Criopreservação; Preservação do Sêmen; Espermatozóide; Reproduçã