Spermatic evaluation of cryopreserved semen from curraleiro/ pé duro bulls in germplasm bank

Esta pesquisa objetivou avaliar a qualidade do sêmen criopreservado de 21 touros Curraleiro/Pé Duro em banco de germoplasma, categorizando as doses dos reprodutores segundo parâmetros espermáticos que buscam a fertilização oocitária, e verificando in vitro o potencial fecundante da dose seminal. Todas as amostras foram descongeladas e analisadas pelos exames espermáticos de morfologia, cinética, integridade da membrana plasmática e integridade do acrossoma; no entanto, só quatro delas também foram avaliadas através das taxas de fecundação, devido ao maior número de palhetas estocadas, as quais permitiram testar mais de um ensaio in vitro. Contaram-se aproximadamente 200 espermatozóides para cada exame, os resultados foram expressos em porcentagens e submetidos a estatística descritiva simples (média e desvio padrão), utilizando como referência comparativa, os padrões sugeridos pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal para sêmen descongelado bovino, assim como valores obtidos em outras pesquisas. Os resultados dos quatro exames espermáticos foram verificados, e buscaram-se os parâmetros mais importantes que visam a fertilidade, sendo na morfologia a taxa de espermatozóides normais (NRM) e defeitos maiores (DMA); na cinética, a motilidade progressiva (MP) e células rápidas (RPD); na integridade da membrana plasmática, a membrana plasmática íntegra (MPI) e na integridade do acrossoma, o espermatozóide vivo com acrossoma íntegro (EVAI). Das 21 doses analisadas, dez apresentaram valores adversos nos parâmetros espermáticos mencionados, e dessas amostras, sete mostraram divergências, porque tinham resultados negativos para a fecundação em alguns exames e resultados favoráveis em outros, revelando a complexa natureza do espermatozóide. Tomaram-se em conta para as correlações de Pearson, análise de Cluster e elaboração de um dendrograma, os parâmetros NRM, DMA, MP, RPD, MPI e EVAI. O Cluster criou por similaridade espermática três grupos (G1, G2 e G3), para morfologia, cinética, integridade da membrana plasmática e integridade do acrossoma. Os resultados foram avaliados mediante estatística descritiva simples, e a diferença das médias pelos testes de Duncan e Kruskal Wallis, ao nível de significância de 5%. Vale salientar que no dendrograma a DT10 e DT19 foram discriminadas dos grupos por ter valores muito distantes do resto das doses seminais. Na avaliação das taxas de fecundação, foram feitas três réplicas com as palhetas dos quatro touros escolhidos, passando previamente através do gradiente Percoll (45:90%), para eliminar as células defeituosas e melhorar a capacidade fecundante. Esta seleção permitiu resultados favoráveis, com taxas de oócitos fertilizados superiores a 60%. Na avaliação da cromatina masculina 18 horas pós inseminação in vitro foram observadas altas taxas para Pronúcleo. A diferença estatística destes valores foi estimada pelo teste Chi-quadrado. Os resultados revelaram a qualidade espermática e capacidade fecundante in vitro do sêmen Curraleiro/Pé Duro analisado, possibilitando delinear adequadas estratégias, para a conservação deste recurso genético local em extinção, possuidor de características únicas de adaptação e rusticidade, que poderiam ser inseridas futuramente nos rebanhos bovinos brasileiros.This investigation aimed to evaluate the quality of cryopreserved semen from 21 Curraleiro/Pé Duro bulls in germplasm bank, categorizing the doses of the sires according to spermatic parameters that search the oocitary fertilization, and verifying in vitro the fecundant potential of the seminal dose. All the samples were thawed and analyzed by the spermatic exams of morphology, kinetics, integrity of plasmatic membrane and integrity of acrosome; however, only four of them also were evaluated through the fertilization rates, due to the major number of stocked straws, which allowed to test more than one in vitro essay. Approximately 200 spermatozoids were counted for each exam, the results were expressed in percentages and submitted to simple descriptive statistics (mean and standard deviation), using as comparative reference, the patterns suggested by the Brazilian Animal Reproduction College for bovine thawed semen, as well as values obtained in other investigations. The results of the four spermatic exams were verified, and were searched the most important parameters that aim the fertility, being in the morphology the rate of normal spermatozoids (NRM) and major defects (DMA); in the kinetics, the progressive motility (MP) and rapid cells (RPD); in the integrity of plasmatic membrane, the whole plasmatic membrane (MPI); and in the integrity of acrosome, the live spermatozoid with whole acrosome (EVAI). From the 21 analyzed doses, ten presented adverse values in the mentioned spermatic parameters, and of these samples, seven showed divergences, because they had negative results for fertilization in some exams and favorable results in others, revealing the complex nature of the spermatozoid. Were taken into account for Pearson correlations, Cluster analysis and a dendrogram elaboration, the parameters NRM, DMA, MP, RPD, MPI and EVAI. The Cluster created by spermatic similarity three groups (G1, G2 e G3), for morphology, kinetics, integrity of plasmatic membrane and integrity of acrosome. The results were evaluated through simple descriptive statistics, and the difference of means by Duncan and Kruskal Wallis tests, at 5% significance level. It is worth mentioning that in the dendrogram the DT10 and DT19 were discriminated from the groups for having very distant values from the rest of seminal doses. In fecundation rates evaluation, three replicates were made with the straws of the four chosen bulls, passing previously through Percoll gradient (45:90%), for eliminating the defective cells and improving the fertilizing capacity. This selection allowed favorable results, with rates of fertilized oocytes superior to 60%. In the evaluation of masculine chromatin 18 hours post in vitro insemination high Pronucleus rates were observed. The statistical difference of these values was estimated by Chi-square test. The results revealed the spermatic quality and in vitro fecundant capacity of Curraleiro/Pé Duro analyzed semen, enabling to delineate appropriate strategies, for the conservation of this local genetic resource in extinction, owner of unique characteristics of adaptation and rusticity, that could be included hereafter in the brazilian cattle herds