Hydrophilic interaction chromatography – HILIC/NH2 –in separation of mono, disaccharides and sugar fractions from whey

Wysokosprawna chromatografia oddziaływań hydrofilowych - HILIC-HPLC, to alternatywne - w stosunku do warunków faz odwróconych RP-HPLC - warunki rozdzielania polarnych, rozpuszczalnych w wodzie składników mieszanin. Wykorzystywanie w warunkach HILIC jednocześnie kilku mechanizmów rozdzielenia, umożliwia rozdzielenie mieszanin polarnych składników, trudnych, albo niemożliwych do rozdzielania w warunkach RP, w tym, mono i disacharydów. Praca dotyczy badań nad określeniem optymalnych warunków rozdzielania wybranych mono i disacharydów w warunkach HILIC, z zastosowaniem kolumn HPLC z fazą stacjonarną typu NH2, na bazie żelu krzemionkowego i eluentów będących mieszaninami acetonitrylu oraz wody. Przedstawiono możliwość i wyniki rozdzielania mieszanin cukrów redukujących i nieredukujących. Stwierdzono rozdzielanie poszczególnych anomerów cukrów redukujących - zależnie od warunków separacji. Wykonane badania pozwoliły też na zaproponowanie metodyki oznaczania laktozy i glukozy we frakcjach eluatu z preparatywnego rozdzielania składników serwatki mleka.High performance hydrophilic interaction chromatography - HILIC-HPLC is an alternative technique - to the conditions of reverse phase chromatography (RP-HPLC) - for the separation of polar, water-soluble components of complex mixtures. This technique uses several mechanisms of separation what allows the separation of mixtures of polar components which are difficult or impossible to separate under RP, including mono- and disaccharides. This work relates to studies on determining the optimum conditions for the separation of mono- and disaccharides the selected conditions HILIC, using an HPLC column the amino-type stationary phase, based on silica gel and mobile phases which are mixtures of acetonitrile and water. The possibility of separating sugar mixtures and non-reducing sugars is shown as well as the separation of the individual anomers of reducing sugars - depending on the conditions of separation. The presented studies propose a methodology of determination of lactose and glucose in the fractions eluted from the preparative separation of milk whey components