Expression of gap junction proteins, the connexins, in normal and neoplastic osseous tissues from dogs

Tem sido demonstrado que a capacidade de comunicação intercelular via junções do tipo gap tem relevância na formação óssea. A principal conexina envolvida no desenvolvimento, na diferenciação e na regulação de crescimento de tecidos ósseos é a conexina 43. Contudo, outras duas conexinas expressas, são a Cx 45, que aparece em menor número em relação a Cx43, e a Cx46 que é caracterizada por ser detectada freqüentemente associada à região transi-Golgi. Alterações no perfil de expressão e localização aberrante das conexinas têm sido associadas a oncogênese, demonstrando uma diminuição da expressão destas conexinas em tecidos neoplásicos. Escassos são os estudo que avaliaram a expressão das conexinas 43, 45 e 46 em células de osteossarcoma, e nenhum estudo enfocando este aspecto foi realizado em osteossarcoma canino. No presente foram avaliados os tecidos ósseos normais e neoplásico de cães quanto à expressão das Cx43, e 46 por meio de imunofluorescência, os níveis de expressão das mesmas conexinas por meio de Western blot e por PCR em tempo real, assim como sua correlação com o tipo de tumor ósseo, associado ao exame histopatológico de rotina. Os resultados mostraram que os níveis de expressão gênica da Cx43 foram semelhantes entre o tecido ósseo normal e neoplásico, sendo as mesmas encontradas no citoplasma e membrana citoplasmática. A conexina 46 foi encontrada retida em região perinuclear, tendo níveis diferentes de expressão gênica entre os tecidos ósseo normal e neoplásico. Concluímos então que a conexina 43 é expressa por osteoblastos normais e neoplásicos em níveis semelhantes, porém há diferenças na expressão de Cx46. Concluímos também que existem diferenças quanto à localização subcelular destas duas conexinas em tecidos ósseos normais e neoplásicos de cães. Estes resultados indicam um possivel envolvimento das conexinas 43 e 46 em tumores ósseos de cães.Increasing evidence indicates that junctional communiction by gap juctions has a critical role in a bone physiology. The main connexin (Cx) express involved in development, differentiation and regulation of tissue growth, is the called Cx43. However, other, two connexis are expressed: Cx45 and Cx46. Cx46 is retained as monomers in a trans-golgi compartment of osteoblastic cells. Alterations in the expression profile and aberrant localization of the conexinas have been associated to oncogenesis, demonstrating a reduction of the expression of these conexins in neoplastic tissues. In the present study, we aimed at evaluating the expression of Cx43 and Cx46 in normal and neoplastic osseous tissues from dogs, by means of immunofluorescence, Western blot and Real time- PCR. These results were correlated with the routine histological evaluation of the bone tumor. Results showed that the levels of genetic expression of Cx43 were similar in both normal and neoplastic osseous tissues from dogs, and the Cx43 were found both in the cytoplasm and in the cytoplasmic membrane. Connexin 46 was found in the perinuclear region of neoplastic osteoblasts, and different levels of genic expression were found between normal and neoplastic osseous tissues. We can conclude that the Cx43 is similarly expressed by both normal and neoplastic osteoblasts from dogs, however there are differences in the expression of Cx46. These results point to a possible role of connexins 43 and 46 in dog bone tumors