Osteoblast-specific connexin 43 gene deletion in mice: fenotipic characterization

Os osteoblastos sao altamente acoplados por juncoes gap formadas pela conexina 43 (Cx43). Disturbios da expressao ou funcao da Cx43 in vitro alteram a expressao genica nos osteoblastos, enquanto a defiCiência genetica da Cx43 in vivo causa letalidade perinatal, defeitos do desenvolvimento do esqueleto craniofacial e disfuncao autonoma do osteoblasto. Para determinar o papel da Cx43 no pico de massa ossea e na manutencao da homeostase mineral no esqueleto adulto, nos desenvolvemos um modelo animal (camundongo) de delecao do gene da Cx43 seletivamente em osteoblastos (knock-out condicional), usando o sistema Cre/IOxP, de modo a evitar a letalidade perinatal associada a estrategia convencional de delecao do gene da Cx43 (knock-out convencional). Nesse modelo condicional, a recombinase Cre catalisa um evento de recombinacao genica que resulta na substituicao da regiao codificadora do gene da Cx43 por um cassete codificador da (3-galactosidase, LacZ. Uma linhagem de camundongos portadores da mutacao floxed do alelo da Cx43 (Cx43fl) foi gerada na qual a regiao codificadora do gene da Cx43 e flanqueada por dois sitios P's (IoxP). Camundongos homozigotos para a mutacao floxed (Cx43fl/fl) foram cruzados com camundongos com expressao transgenica da recombinase Cre sob controle do fragmento de 2.3 Kb do promotor do gene do colageno tipo I e heterozigotos para a mutacao nula convencional da Cx43 (Cola([)-Cre;Cx43+/-). Dessa forma, camundongos knockout condicional da Cx43 (Col(I)-Cre;Cx43-/fl) e seus respectivos controles (Cx43+/fl, Col(I)-Cre;Cx43+fl e Cx43-/fl) foram gerados em numerosa(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe