Untersuchungen zur Expression der Nicotinamid N-Methyltransferase im klarzelligen Nierenzellkarzinom

Mit einer steigenden Anzahl der Neuerkrankungen in den letzten 20 Jahren ist das Nierenzellkarzinom in Deutschland die dritthäufigste bösartige Erkrankung des Urogenitaltrakts. 75 % dieser malignen epithelialen Tumoren sind klarzellige Nierenzellkarzinome. Trotz des technischen Fortschritts in der Medizin ist die Diagnose Nierenzellkarzinom noch häufig ein sonografischer Zufallsbefund, denn klinische Symptome sind initial meist unspezifisch. Nach einer Tumornephrektomie erleiden 30 bis 40 % der Patienten ein Rezidiv, wobei zirka 2/3 in den ersten zwei Jahren nach Primärtherapie beobachtet werden. Spätmetastasen können beim Nierenzellkarzinom charakteristischerweise auch nach mehr als 15 Jahren auftreten. Diese Fakten legen nahe, dass eine frühzeitige Diagnosestellung den Erfolg einer entsprechenden Behandlungsstrategie mitbestimmt. Dieser Arbeit vorausgegangene Proteomanalysen zeigten eine differentielle Expression der Nicotinamid N-Methyltransferase im klarzelligen Nierenzellkarzinom. Auf der Grundlage der gefundenen tumorassoziierten Enzymalteration wurden im Rahmen dieser Arbeit Gewebeproben von 20 Patienten mit klarzelligem NZK molekularbiologisch untersucht um den Expressionsunterschied des Enzyms Nicotinamid N-Methyltransferase zu verifizieren. Pro Patient wurde die Expression der Nicotinamid N-Methyltransferase im Tumorgewebe sowie im makroskopisch unauffälligen Nierenrandgewebe analysiert. Der Nachweis der NNMT erfolgte anhand folgender Methoden: semiquantitative RT-PCR, quantitative real-time-PCR (SYBR® Green I- sowie TaqMan®-Assays), Western Blot, Immunhistochemie. Alle Untersuchungsmethoden bestätigten eine erhöhte Expression der NNMT im klarzelligen NZK im Vergleich zum Kontrollgewebe, wobei ein statistisch signifikanter Unterschied in der Western Blot-Analyse am deutlichsten war. Ein Zusammenhang zwischen der NNMT-Expression und Tumorstadium beziehungsweise Grading wurde weder auf Protein- noch auf RNA-Ebene gefunden. Mögliche Forschungsansätze könnten unter anderem die Untersuchung genetischer Polymorphismen, Mutationsanalysen, die Korrelation von NNMT-Genexpression und HNF-1beta-Genexpression im Nierenzellkarzinom sowie die Interaktion der NNMT in Angiogeneseprozesse bieten.With an increasing number of new cases in the last 20 years the renal cell carcinoma in Germany is the third most common malignant disease of the urogenital tract. 75 % of these malignant epithelial tumors are clear cell renal cell carcinomas. Despite technological advances in medicine is to diagnose renal cell carcinoma more frequently a sonographic chance finding, because clinical symptoms are often initially nonspecific. Suffer after a nephrectomy 30 to 40 % of patients relapse, with approximately 2/3 in the first two years are observed after primary therapy. Late metastases can occur in renal cell carcinoma characteristically even after more than 15 years. These facts suggest that early diagnosis determined the success of an appropriate treatment strategy. This work previous proteome analysis showed a differential expression of nicotinamide N-methyltransferase in clear cell renal cell carcinoma. On the basis of the detected tumor-associated enzyme alteration were in this study tissue samples from 20 patients with clear cell RCC investigated using molecular biological techniques to verify the differential expression of the enzyme nicotinamide N-methyltransferase. Per patient the expression of nicotinamide N-methyltransferase in tumor tissues and in kidneys macroscopically inconspicuous rim tissue was analyzed. The detection of NNMT was using the following methods: semi-quantitative RT-PCR, quantitative real-time-PCR (SYBR® Green I and TaqMan® assays), Western blot, immunohistochemistry. All test methods confirmed an increased expression of NNMT in clear cell RCC compared to control tissue, with a statistically significant difference in Western blot analysis was most pronounced. A correlation between NNMT expression and tumor stage or grading was found neither on protein nor on RNA level. Possible research approaches could offer among other things the investigation of genetic polymorphisms, mutation analysis, the correlation of NNMT gene expression and HNF-1beta gene expression in renal cell carcinoma as well as the interaction of NNMT into angiogenesis processes