Estudos das vias de sinalização mobilizadas pela cepa G de Trypanosoma cruzi na invasão celular, da sinalização intracelular ativada pela proteína P21-HIS6 e seu renovelamento

Trypanosoma cruzi is the etiologic agent of Chagas disease, which induces a pathological hypertrophy in the heart, esophagus and colon. This disease affects millions of peoples in Latin America. Recently our group characterized a 21 kDa T. cruzi recombinant protein (P21-His6) based on native form secreted by T. cruzi. P21-His6 is purified from insoluble inclusion bodies or soluble fraction from bacterial extract. The protein obtained from each protocol has identical secondary structure and was capable of inducing parasite phagocytosis and increased zymosan particles internalization by macrophages cell being that process PI3 kinase signaling pathway dependent. In addition the refolding protocol generates of high amounts of the recombinant protein. Also we investigated the signaling pathway involved in amastigotes and trypomastigotes (living, dead and opsonized) T. cruzi developmental stages invasion using macrophages treated or not with signaling pathway inhibitors drugs. Opsonized parasites are internalized a lot. Living amastigotes triggered PI3K and MAPK signaling pathways, dead amastigotes activated only MAPKs pathway. Living and dead trypomastigotes activated all the signaling pathways studied.Mestre em Biologia Celular e Estrutural AplicadasTrypanosoma cruzi é o causador da Doença de Chagas, a qual induz alterações patológicas severas no coração, esôfago e cólon, afetando milhões de pessoas na América Latina. Recentemente nosso grupo caracterizou uma proteína recombinante de 21 kDa (P21-His6) baseada na forma nativa secretada por T. cruzi. Essa proteína aumentou a internalização de parasitas na célula hospedeira e estimulou o processo fagocítico de partículas de zymosan por macrófagos peritoneais. A proteína recombinante é purificada a partir dos corpos de inclusão e também a partir da fração solúvel do extrato bacteriano. As proteínas obtidas a partir de cada fração foram comparadas para verificar se o processo de renovelamento produzia uma proteína com a mesma estrutura secundária da proteína solúvel. Confirmou-se que independente do protocolo de purificação a estrutura secundária da proteína é a mesma, sendo que a proteína obtida a partir de cada fração é capaz de aumentar a internalização de parasitas e estimular o processo fagocítico de forma dependente da via de sinalização da PI3K. Os corpos de inclusão do extrato bacteriano fornece uma quantidade maior de proteína. Também investigamos as vias de sinalização envolvidas na invasão de macrófagos peritoneais, tratados com drogas inibidoras, por formas amastigotas extracelulares e tripomastigotas de cultura de tecido da cepa G de T. cruzi nas situações em que os parasitas estavam vivos, mortos ou opsonizados. Parasitas opsonizados são intensamente internalizados nos macrófagos tratados com inibidores das vias de sinalização. Amastigotas extracelulares (AE) vivos ativam as vias de PI3K e MAPKs e são internalizados em maior quantidade que AE mortos, que ativam apenas as vias das MAPKs. Tripomastigotas de cultura de tecidos vivos e mortos ativaram todas as vias de sinalização aqui estudadas