Mechanisms of infection by Trypanosoma Cruzi: cellular invasion and activation of distint signal transduction pathways in metacyclic forms of different isolates

A invasao celular pelo Trypanosoma cruzi requer a ativacao de vias de transducao de sinal, que resulta em mobilizacao de Ca 2+ intracelular tanto no parasita quanto na celula hospedeira. Usando drogas que interferem nos processos de sinalizacao, investigamos se a diferenca na capacidade dos isolados de T. cruzi em invadir a celula hospedeira esta associada com a ativacao de distintas vias de sinalizacao nos parasitas. Os experimentos foram realizados com tripomastigotas metaciclicos, formas que iniciam a infeccao no hospedeiro mamifero, usando o isolado CL altamente invasivo e o isolado G pouco infectivo, os quais pertencem a diferentes linhagens filogeneticas. O tratamento dos parasitas com forscolina, um ativador da adenilato ciclase, aumentou a infetividade do isolado G, mas nao do isolado CL frente as celulas HeLa. Por outro lado, a genisteina, um inibidor especifico da proteina tirosina quinase, reduziu em -75 por cento a penetracao do isolado CL, mas nao do isolado G, nas celulas HeLa. No isolado CL, mas nao no isolado G, a fosforilacao de uma proteina de 175 kDa e mediada pela proteina tirosina quinase, de maneira indutivel pelo extrato de celulas HeLa. Apos tratamento com U73122, um inibidor da fosfolipase C, ou com cafeina, que afeta a liberacao de Ca 2+ de depositos sensiveis a inositol-1,4,5-trifosfato, ou tapsigargina, um inibidor da ATPase transportadora de Ca 2+ intracelular, a infectividade do isolado CL, mas nao do isolado G, foi reduzida significativamente. Em ambos os isolados, a combinacao de ionomicina mais NH4C1 ou nigericina foi capaz de liberar Ca 2+ de vacuolos acidicos que contem um sistema trocador de Ca 2+/H+. O tratamento com a combinacao dessas drogas reduziu a infectividade das formas metaciclicas do isolado G, mas nao do isolado CL. Assim, estes dados sugerem que, para a invasao celular, distintas vias de sinalizacao sao ativadas em tripomastigotas metaciclicos dos dois isolados, levando a liberacao de Ca 2+ de diferentes depositos intracelularesa(au)BV UNIFESP: Teses e dissertaçõe