Avaliação de Três Técnicas de Isolamento de Polifenóis: aplicação em amostras de chocolate meio amargo

Polyphenols were intrinsic components of the cocoa; therefore, derivative products of cocoa, like chocolate, can be considered functional food, bringing beneficial effects to costumer's health, as it is suggested for red wine and green or black tea. Nutrition and medicine areas have dedicated special attention to these components. That is due to evidences that polyphenols can act as potential antioxidants, and that they can carry out an important function in the reduction of the risk or delay of the development of diseases, like the cardiovascular ones, cancer and other ones related to aging; and yet, that they can modulate essential biological processes mammals in vivo. The first objective of this work was to evaluate novel stationary phases for the isolation of polyphenols, by the use of polyurethane foam and of a polymeric resin (XAD-16). Therefrom, to determine the best phase by comparison of performance with the one of a phase previously described in literature (C18), by high-performance liquid chromatography (HPLC). Once the phase is chosen, the second objective is to isolate polyphenols from chocolate samples. An index was established to monitor the performance by the ratio P/C, the ratio of heights or absorbances (mAU) of the largest peak among the ones attributed to polyphenols and the largest peak among the ones attributed to carbohydrates. The chosen column was XAD-16, given the observed separation of the polyphenols and reprodutibility of elutions, which was confirmed by triplicate procedures. The polymeric resin XAD-16 was shown as a quite effective way to isolate polyphenols from carbohydrates because the latter are eluted with water while the polyphenols are retained. Subsequent methanol elution was considered quite appropriate for the recovery of polyphenols, because the chromatograms of the fractions obtained yielded P/C ratios much higher than 100%, even considering very small contents of polyphenols.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorOs polifenóis são componentes intrínsecos do cacau, e assim, produtos derivados do cacau, como o chocolate, podem ser considerados como alimento funcional por conferirem efeitos benéficos à saúde do consumidor, como é sugerido para o vinho tinto e o chá verde ou preto. Devido à evidência de que os polifenóis podem agir como potenciais antioxidantes, desempenhar uma importante função na redução do risco ou retardo do desenvolvimento de doenças, como as cardiovasculares, câncer e outras relacionadas à idade; e ainda, modular processos biológicos essenciais em mamíferos in vivo; as áreas de nutrição e medicina têm tido um especial interesse nestes compostos. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar novas fases estacionárias para isolamento de polifenóis, através do uso da espuma de poliuretano e de resina polimérica (XAD-16) e determinar a fase de maior eficiência, comparando-se os dados obtidos com aqueles descritos na literatura (C18). O monitoramento da eficiência do processo foi feito por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC), cujos dados permitiram estabelecer um índice que mede a relação P/C, como sendo a relação entre o maior pico do polifenol e o maior pico do carboidrato, expressos através de suas alturas ou absorbâncias (mAU). A resina XAD-16 se mostrou como a fase de maior eficiência e foi usada para isolar os polifenóis presentes em amostras de chocolate. Foi alcançada uma significativa separação dos polifenóis com reprodutibilidade comprovada através dos experimentos em triplicata. Nesta fase estacionária, a água se apresentou como um eluente adequado para carboidratos, enquanto o metanol foi eficaz na eluição dos polifenóis, pois foram obtidas frações cujos cromatogramas permitiram calcular razões P/C muito maiores que 100%, mesmo diante de teores muito pequenos de polifenóis