Utilização do kit DNA IQ™ system na extração de dna por lise diferencial em amostras coletadas de vítimas de crime sexual

Forensic samples from cases of sexual crime are often characterized by an unbalanced mixture between the victim's epithelial cells and sperm cells of the offender. DNA extraction by organic differential lysis is still the methodology routinely used to process the separation of male and female DNA in these samples, based on the resistance of the nuclear membrane of the sperm cells to certain reagents. However the technique is extremely time consuming and uses toxic organic solvents such as phenol and chloroform and modifications in this protocol has been a challenge for the forensic laboratories in the world. This study propose the use of DNA extraction kit DNA IQ™ System (Promega) with magnetic particles to eliminate some drawbacks of the standard technique. To perform a comparative analysis between the current use technique and the proposed, 50 samples of sexual crimes were submitted to the same analysis conditions by the two methodologies, resulting in 100 extraction products non-sperm fraction (NSF) and 100 sperm fraction (SF) results. Samples were quantified by real-time PCR using the Plexor HY® System kit (Promega) to evaluate the quantity and quality of amplified autosomal and Y chromosome DNA. 86% of the sperm fractions (SF) from the extraction using the DNA IQ™ System kit presented higher amount of amplified DNA autosomal compared to the standard differential extraction. With respect to Y chromosome DNA, 66% of the samples extracted using the commercial kit technique offered higher amounts of amplified DNA as compared to the standard technique. Statistical analyzes were performed using GraphPad Prism® v.6.0 software and the Wilcoxon test showed that the differences were considered statistically significant with p < 0.0001. The research demonstrated that the technique using the DNA IQ™ System kit is more efficient than the organic differential technique in all analyzed parameters, providing the elimination of toxic solvents, guaranteeing greater security for the forensic analyst, faster execution of the extraction and favorable quantity and quality of recovered DNA. Therefore, its implementation is indicated as an alternative method in forensic laboratories to analyze samples of sexual crime.NenhumaAs amostras forenses decorrentes de casos de crime sexual caracterizam-se, muitas vezes, por uma mistura desequilibrada entre células epiteliais da vítima e espermatozoides do agressor. A extração de DNA por lise diferencial orgânica ainda é a metodologia rotineiramente utilizada para processar a separação de DNA masculino e feminino nestas amostras, baseada na resistência da membrana nuclear dos espermatozoides a determinados reagentes. Entretanto a técnica é extremamente morosa e utiliza solventes orgânicos tóxicos como o fenol e o clorofórmio. Modificações neste protocolo tem sido um desafio para os laboratórios forenses no mundo. O presente estudo propôs a utilização do kit de extração DNA IQ™ System(Promega) com partículas magnéticas para eliminação de alguns inconvenientes da técnica padrão. Para realizar uma análise comparativa entre a técnica de uso corrente e a proposta, 50 amostras de crimes sexuais foram submetidas às mesmas condições de análise pelas duas metodologias, resultando em 100 produtos de extração de fração não espermática (FNE) e 100 de fração espermática (FE). As amostras foram quantificadas por PCR em tempo real utilizando o kit Plexor HY® System (Promega) para avaliar a quantidade e a qualidade de DNA autossômico e de cromossomo Y recuperados. Das amostras de frações espermáticas (FE) analisadas utilizando o kit DNA IQ™ System 86 % apresentaram maior quantidade de DNA autossômico quantificado em comparação à extração diferencial padrão. Com relação ao DNA de cromossomo Y, 66 % das amostras extraídas utilizando a técnica com o kit comercial ofereceram maior quantidade de DNA quando comparadas com a técnica padrão. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o software GraphPad Prism® v.6.0. e o teste de Wilcoxon mostrou que as diferenças foram consideradas estatisticamente significativas com o valor de p < 0,0001. A presente pesquisa demonstrou que a técnica utilizando o kit DNA IQ™ System é mais eficiente que a técnica diferencial orgânica em todos os parâmetros analisados proporcionando a eliminação de solventes tóxicos, garantindo maior segurança ao analista forense, maior rapidez de execução da extração e quantidade e qualidade favorável de DNA recuperado. Portanto, sua implementação é indicada como método alternativo nos laboratórios forenses para análise de amostras de crime sexual