Análise molecular com Y-STRs em amostras biológicas sem espermatozoides coletadas de vítimas de estupro

A detecção de espermatozoides em amostras coletadas de vítimas de estupro confirma a ocorrência do ato sexual, enquanto a sua ausência normalmente encerra a investigação biológica no crime em questão, deixando uma lacuna quanto è determinação da autoria do delito e até mesmo quanto à tipificação do crime. Em crimes sexuais, no entanto, existe a possibilidade de que o material vaginal coletado não contenha espermatozoides do agressor (por exemplo, em quadro clínico de azoospermia, utilização de preservativo, prática de coito interrompido, etc.), mas apresente células de origem masculina, como células epiteliais ou leucócitos, presentes no líquido seminal. Nesses casos, não existe a possibilidade de separar o material genético de origem masculina por meio da técnica de extração diferencial e a identificação da autoria pela análise do DNA fica prejudicada, pois na amplificação para STRs autossômicos em amostras com mistura de DNA com proporções iguais ou superiores a 50:1, o perfil genético do doador minoritário normalmente não é visualizado. Técnicas moleculares usando Y-STRs representam uma poderosa ferramenta para a identificação de perfis masculinos nesses casos. Com o objetivo de avaliar a amplificação efetiva de Y-STRs em amostras com mistura de DNA masculino e feminino, visando relacionar os resultados obtidos com o histórico de cada caso e definir uma estratégia de ação em casos semelhantes no futuro, seiscentas ocorrências de estupro cujas amostras de conteúdo vaginal apresentaram resultado negativo para a pesquisa de espermatozoides no exame citológico, foram analisadas. Foram selecionados 150 casos de vítimas femininas em que o histórico apontava para a ocorrência de estupro com possível penetração e/ou ejaculação, cuja comunicação do fato fora realizada até 4 dias após a ocorrência do evento delituoso. Após a quantificação, verificou-se que em 43% dos casos selecionados foi detectada a presença de DNA de origem masculina, sendo que em 83% das amostras a proporção de DNA feminino em relação à quantidade de DNA masculino foi superior a 100:1. As amostras com presença de DNA de origem masculina foram amplificadas para 16 Y-STRs (DYS456, DYS389 I, DYS389 II, DYS392, DYS393, DYS438, DYS390, DYS458, DYS19, DYS385, DYS391, DYS439, DYS635, Y_GATA_H4, DYS437 e DYS448), sendo obtidos quatro tipos de perfis, definidos de acordo com o número de locos Y-STRs com produto de amplificação, variando de haplótipo insuficiente (até 5 locos Y-STRs) ao haplótipo completo. A detecção do antígeno prostático específico (PSA) foi realizada em todas as amostras selecionadas e os resultados obtidos são conflitantes com os resultados da quantificação de DNA masculino em 28,6% das amostras analisadas. Os resultados obtidos corroboram exercícios realizados anteriormente e mudaram a rotina do Instituto de Pesquisa de DNA Forense da Polícia Civil do Distrito Federal, quanto à definição pela análise genética de amostras coletadas de vítimas de estupro, na ausência de espermatozoides.The detection of sperm cells in samples collected from victims of sex crimes confirms the occurrence of the sexual act, while its absence usually closes biological research, leaving a gap as to the authorship of the crime and even how to define whether there was a crime. In sex crimes, however, there is the possibility that the collected vaginal material does not contain rapists sperm cells (e.g., azoospermy, condom use, practice of coitus interruptus), but other male cells like epithelial cells or leukocytes may be present in seminal fluid. In these cases, the isolation of male cells by differential extraction technique is not possible and the identification of authorship by DNA analysis is impaired, since the amplification for authosomal STRs in samples with a mixture of DNA with ratios equal to or greater to 50:1, the genetic profile of minority donors is not commonly displayed. Molecular techniques using Y-STRs are a powerful tool for the identification of male profiles in these cases. In order to evaluate the effective amplification of Y-STRs in samples with mixture of male and female DNA, looking for relate the results obtained with the history of each case and devise a strategy for action in similar cases in the future, six hundred incidents of rape victims whose samples were negative in study sperms cells were analyzed. We selected 150 female victims cases when the history pointed to possible occurrence of rape with penetration and ejaculation or, whose communication was actually held up to 4 days after the criminal fact. Following the quantification, it was found that in 43% of selected cases was detected the presence of male DNA source, and in 83% of the samples the proportion of female DNA in relation to the amount of male DNA was greater than 100:1. The samples with male DNA were amplified for 16 Y-STRs (DYS456, DYS389 I, DYS389 II, DYS392, DYS393, DYS438, DYS390, DYS458, DYS19, DYS385, DYS391, DYS439, DYS635, Y_GATA_H4, DYS437 and DYS448) and the profiles obtained were classified into four types, defined according to the number of Y-STRs loci with amplification product, ranging from insufficient haplotype (up to five Y-STRs loci) to complete haplotype. Detection of prostate specific antigen (PSA) was performed in all selected samples and the results are conflicting with the quantification of male DNA in 28.6% of them. These results confirm previous work performed by other authors and moreover changed the routine of the Instituto de Pesquisa de DNA Forense of Civil Police of the Federal District in Brazil, in order to define whether or not the genetic analysis of samples collected from rape victims in cases without sperm cells