PI3K signaling pathway activation and inactivation in head and neck squamous cell carcinoma: correlation with AET, B-catenin, cyclin D1 and PTEN expression

O carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço é responsável por 90% das neoplasias malignas, nesta região. Molecularmente, inúmeras vias de sinalização, ainda não muito bem compreendidas, são responsáveis pelo seu crescimento e invasão para tecidos vizinhos, além de metástases para órgãos distantes. Este trabalho destinou-se a avaliar o crosstalk entre as vias de sinalização do Wnt e PI3K, quando células de carcinoma epidermóide (HN6 e HN31) e queratinócitos imortalizados (HaCat), foram estimulados com 50nM Wortmannin (metabólito fúngico que mimetiza a função da PTEN) e 10ng/ml EGF (fator de crescimento epitelial). Para isto, proteínas-chave, pertencentes a estas vias, foram localizadas e quantificadas no interior celular: PTEN, ?-catenina, Akt, pAkt e Ciclina D1. As técnicas de imunofluorescência e western blot foram utilizadas, respectivamente, para observar a localização e os níveis destas proteínas, nos diferentes compartimentos celulares. Os resultados mostraram que a ativação da via do PI3K, pelo EGF, promoveu a proliferação celular, independentemente da via de sinalização do Wnt. Quando as células foram tratadas com wortmannin, houve depleção dos níveis citosólicos e totais de pAkt associada ao acúmulo citoplasmático de ciclina D1. Igualmente, não houve alteração nos níveis da proteína ?-catenina. Ademais, detectou-se a presença de PTEN nuclear em todas as linhagens estudadas. Desta forma, estas células de carcinoma epidermóide de cabeça e pescoço, apresentaram mecanismos de bloqueio e de ativação da proliferação celular, predominantemente, por atividade das proteínas PTEN (atividades citoplasmática e nuclear) e Akt, após o tratamento com wortmannin e EGF.Head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) represents 90% of all head and neck malignancies. Cancer growth, invasion and metastasis are due to several signaling pathways that, unfortunately, are not completely understood. The aim of this study was the crosstalk evaluation between PI3K and Wnt signaling pathways in two different HNSCC cell lines (HN6 and HN31) and HaCat cell line (immortalized keratinocytes), treated with 50nM wortmannin and 10ng/ml EGF (epidermal growth factor). Western blot and imunofluorescence were performed in order to analyze Wnt, PTEN and PI3K signaling key target proteins: PTEN, Akt, CyclinD1 and ?-catenin. Results showed that ?-cateninindependent cellular proliferation was promoted by PI3K signaling pathway EGF-dependent activation. After wortmannin treatment, correlation between decreased phospho-Akt levels and cytosolic cyclin D1 accumulation was found. Also, all cell lines exhibited nuclear PTEN activity. Taking these results together, we conclude that the Cyclin D1 positive and negative modulations, after EGF and wortmannin treatments, were due to, respectively, Akt and PTEN proteins