The investigation of DR4, CASP8, hMLH1 and TES genes methylation in glioblastoma

Genų promotorių metilinimas yra pagrindinis mechanizmas veikiantis genų ekspresiją daugelyje navikų, todėl molekulinių epigenetinių žymenų paieška juose, tame tarpe ir galvos smegenų navikuose glioblastomose, svarbi jų ankstyvai diagnostikai. Mūsų tyrimo tikslas - nustatyti DR4, CASP8, hMLH1 ir TES genų metilinimą galvos smegenų glioblastomose. Ištirti 97 glioblastomomis sergantys pacientai. Genų promotorių metilinimui glioblastomose nustatyti atlikta metilinimui specifinė polimerazės grandininė reakcija. Atlikus DR4, CASP8, hMLH1, ir TES geno promotorinių sekų metilinimo tyrimus nustatyta, kad DR4 geno promotorius buvo metilintas 55,7 proc. (54/97), CASP8 – 42,3 proc. (41/97), hMLH1 – 2,1 proc. (2/97), TES – 67 proc. (65/97) tirtų glioblastomų pavyzdžių. Išanalizavus dviejų genų metilinimo tame pačiame navike dažnį pastebėta tarpusavio metilinimo tendencija (p=0.053) tarp DR4 ir TES genų, kurių kometilinimas sudarė 33 proc. Lyginant genų promotoriaus metilinimo dažnį tarp pacientų amžiaus grupių (iki 60 metų ir virš 60 metų), Kaplano-Mejerio analizė parodė, jog visų keturių genų promotoriaus metilinimas dažniau nustatomas vyresnio amžiaus pacientams, tačiau duomenys nėra statistiškai patikimi (p>0,05). Lyginant visų tirtų genų promotoriaus metilinimo dažnį tarp vyrų ir moterų, stebėtas dažnesnis tirtų genų promotorinės srities metilinimas moteriškos lyties glioblastomomis sergančių pacientų navikuose, tačiau statistinis patikimumas gautas nebuvo (p>0,05). Nustatyta, kad DR4 ir CASP8 genai yra dažniau metilinti tarp pacientų išgyvenusių iki 36 mėnesių, genų metilinimo dažnis šioje grupėje – 39,2 proc. ir 50,5 proc. atitinkamai. Lyginant genų promotorių metilinimo ryšį su išgyvenamumu, nustatyta, kad dažniau pacientai išgyvena ilgiau, kuomet visi tirti genai yra nemetilinti, tačiau tik CASP8 genas parodė ryšio tendenciją išgyventi trumpiau esant metilintam genui (p=0,066).Methylation of promoter region in genes is the major mechanism affecting gene expression of many genes in tumors, therefore tumor screening for molecular epigenetic markers is of high importance in early diagnosis of tumor, in particular glioblastoma. The aim of our study was to examine the methylation of DR4, CASP8, TES and hMLH1 genes in glioblastoma. There were 97 glioblastoma patient tumors sampled for analysis. Methylation specific PCR reaction was used to identify methylated genes. Gene promoter methylation frequency for DR4 was 55.7%, for CASP8 – 42.3 % (41/97), hMLH1 – 2,1% (2/97) and TES – 67% (65/97). Analysis of gene comethylation in the same tissue showed the tendency (p=0.053) of association between methylation of DR4 and TES genes, and the comethylation was 33%. Association analysis in different patient age groups (0.05). Gene methylation analysis in males and females showed the tendency of female patients more frequently having tumors with methylated gene, but the difference was not significant (p>0.05). It was shown that in patient group who survived shorter than 36 months after diagnosis DR4 and CASP8 gene methylation in tumor was more frequent (39.2% and 50.5% respectively) event as compared to tumor methylation pattern of those who survived longer. Kaplan-Meier survival analysis showed that unmethylated status of a gene in a tumor principally was associated with longer survival curve, while only CASP8 gene showed the slight tendency (p=0.066) of significant relationship between patient survival and gene methylation in glioblastoma.Vytauto Didžiojo universiteta