Validation of the HPLC method for citrine determination in the presence of monacolin K.

Cytrynina to metabolit wtórny grzybów pleśniowych takich jak Penicillium , Monascus i Aspergillus, wykazujący działanie cytotoksyczne, nefrotoksyczne oraz hepatotoksyczne. Mikotoksyna ta powstaje podczas procesu fermentacji czerwonego ryżu pleśniowego i w związku z tym może być obecna w suplementach diety zawierających monakolinę K. Celem poniższej pracy było opracowanie i walidacja metody wysokosprawnej chromatografii cieczowej w odwróconym układzie faz z detekcją spektrofotometryczną w zakresie UV umożliwiającą oznaczenie ilościowe cytryniny w wybranych suplementach diety zawierających monakolinę K dostępnych na polskim rynku farmaceutycznym. W badaniach wykorzystano kolumnę chromatograficzną ACE 5 C18-PFP (250 x 4,6 mm). Fazę ruchomą była mieszanina 0,005 M buforu fosforanowego o pH 2,60 i acetonitrylu. Do rozdziału została zastosowana elucja gradientowa. Detekcja spektrofotometryczna prowadzona była w zakresie UV przy długości fali 325 nm.Opracowywana metoda została zwalidowana. Na podstawie uzyskanych wyników stwierdzono, że metoda jest specyficzna, a także cechuje ją dobra czułość oraz liniowość w zakresie stężeń od 0,0035 mg/mL do 0,0052 mg/mL. Wartość LOD wynosi 0,0022 mg/mL, zaś LOQ 0,0035 mg/mL. Dokładność metody wyrażona przez średni procent odzysku wynosi 99,50%. Precyzja i precyzja pośrednia spełniają wymagane kryteria akceptacji, RSD nie przekracza 1,0%.Citrinin is a secondary metabolite of mold fungi such as Penicillium, Monascus and Aspergillus, which has cytotoxic, nephrotoxic and hepatotoxic properties. This mycotoxin is formed during the fermentation process of red rice and can therefore be present in food supplements containing the monacolin K.The purpose of the study was to develop and validate the reversed phase high performance liquid chromatography method with an UV spectrophotometric detection enabling the quantitative determination of citrinin in selected dietary supplements containing the monacolin K available on the pharmaceutical market in Poland.Chromatography was performed on an ACE 5 C18-PFP (250 x 4.6 mm) column. The mobile phase was a mixture of 0.005 M phosphate buffer (pH =2.60) and acetonitrile. A gradient elution was used for the separation. A spectrophotometric detection was carried out in the UV range at 325 nm. The applied method has been validated. Based on the obtained results, it was found that the method is specific and also characterized by a good sensitivity and linearity in the concentration range from 0.0035 mg/mL to 0.0052 mg/mL. The LOD and LOQ values were found to be 0.0022 mg/mL and 0.0035 mg/mL, respectively. The accuracy of the method expressed as the average percent recovery was 99.50%. Good precision and intermediate precision with %RSD less than 1.0% was observed