Problematika HPLC stanovení endogenní hladiny kyseliny lipoové v lidské plazmě

Lipoic acid (LA) is used extensively as a therapeutic agent for the treatment of various diseases. Many methods have been reported for the determination of LA plasma levels and its metabolites after its supplementation, but available information concerning endogenous plasma levels is still scarce. Studies which directly focused on determining the endogenous plasma levels provided highly controversial results, <4.9 nmol/L or 143.7–197.0 nmol/L. The main aim of this study was to verify the levels of free LA in the plasma of 40 individuals (17 women, 23 men). This group was nonsupplemented with LA and met the conditions for incorporation into the blood donors register. We measured the levels of LA using an HPLC method with very sensitive coulometric detection after previous sample preparation including deproteination and solid‐phase extraction with a Phenyl cartridge. Our limit of detection was 1.85 nmol/L and was better than the values reported in studies that directly focused on determining the endogenous plasma levels of LA: 2.4 and 4.9 nmol/L respectively. However, the levels of free LA in the plasma of nonsupplemented voluntary blood donors were not detectable in all cases. The presented results of our study show that endogenous concentrations of LA are <1.85 nmol/L.Kyselina lipoová je široce používána pro léčbu různých onemocnění. Pro stanovení kyseliny lipoové a jejich metabolitů v lidské plazmě po suplementaci bylo publikováno mnoho metod, ale dostupné informace o endogenních plazmatických koncentracích jsou stále nedostatečné. Studie přímo zaměřené na stanovení endogenních hladin v plazmě poskytly vysoce rozporuplné výsledky, <4,9 nmol/l nebo 143,7–197,0 nmol/l. Hlavním cílem studie bylo ověřit hladiny volné kysleiny lipoové v plazmě 40 dobrovolníků (17 žen, 23 můžů). Tato skupina byla nesuplementována kyselinou lipoovou a splnila podmínky pro začlenění do registru dobrovolných dárců krve. Měřili jsme hladiny kyseliny lipoové pomocí HPLC s velmi citlivou coulometrickou detekcí po předchozí přípravě vzorku, která zahrnuje deproteinaci a extrakci na pevné fázi s Phenylovou cartridge. Limit detekce naší metody byl 1,85 nmol/l a byl lepší než hodnoty publikované ve studiích, které byly přímo zaměřeny na stanovení endogenních plazmatických hladin kyseliny lipoové: 2,4 a 4,9 nmol/l. Nicméně ve všech případech byly hladiny volné kyseliny lipoové v plazmě nesuplementovaných dárců krve nedetekovatelné. Výsledky naší studie ukazují, že endogenní koncentrace kyseliny lipoové jsou menší než 1,85 nmol/l