HPLC/ED determination of lipoic acid in human plasma

Kyselina lipoová je přírodně se vyskytující sloučenina, přítomna jako kofaktor v několika mitochondriálních enzymech, které jsou zahrnuty v metabolismu a energetické produkci. Jedná se o 8-uhlíkovou sloučeninu, obsahující dva atomy síry v dithiolanovém kruhu a skládající se ze dvou enantiomerů. Ve své volné formě je kyselina lipoová, především její redukovaná forma, kyselina dihydrolipoová, silným antioxidantem, fungujícím jako "odklizeč" reaktivních forem kyslíku. Dnes je studována zejména pro tyto antioxidační vlastnosti. Pro její analýzu je dostupných mnoho metod. Většina z nich však nejsou vyhovující kvůli jejich nespecifitě, nedostatku citlivosti, dlouhotrvající přípravě vzorku a potřeby drahého analytického vybavení. Z tohoto důvodu jsme se pokusili vyvinout jednoduchou a účinnou metodu pro její stanovení v lidské plazmě použitím HPLC s elektrochemickou detekcí na principu coulometrie. Mobilní fáze byla složená ze směsi 20 mmol/l NaH2PO4/acetonitril/metanol (70:25:5 v/v) a její průtok byl 1 ml/min. Potenciály analytické cely byly nastaveny na 450 mV a 750 mV. Analytické parametry metody jsou dostačující s detekčním limitem11,5 nmol/l. Naše metoda může být použita pro stanovení jak endogenních koncentrací kyseliny lipoové, tak i pro suplementační studie.Lipoic acid is a natural compound present as a cofactor in several mitochondrial enzymes that are involved in metabolism and energy production. It is an eight-carbon compound containing two sulphur atoms in a dithiolane ring structure and consists of two enantiomers. In its free form, lipoic acid, especially its reduced form, dihydrolipoic acid, is a powerful antioxidant, functioning as a reactive oxygen species scavenger. At present, the lipoic acid is studied primarily for its antioxidant properties. Many methods are currently available for the analysis of lipoic acid. Most of these methods are not satisfactory due to thein non-specificity, lack of sensitivity, long-term sample preparation and need for expensive analytical equipment. This is the reason for our tendery to develop simple and effective method for its determination in human plasma by using HPLC with electrochemical detection on the principle of coulometry. The mobile phase consisted of a mixture 20 mmol/l NaH2PO4/acetonitril/methanol (70:25:5 v/v) and the flow rate was 1 ml/min. Potentials of analytical cell were set to 450 mV and 750 mV. Analytical performance of this method is satisfactory with the detection limit 11.5 nmol/l. Our method can be applied for both the determination of lipoic acid in endogenous levels and for supplementation study.Katedra biologických a biochemických vědDokončená práce s úspěšnou obhajobo