Simultaneous quantification of lycopene, B-carotene, retinol and alfa-tocopherol in plasma after a simple extraction procedure : stability study and application to human volunteers

Um método para quantificação simultânea de licopeno, β-caroteno, retinol e α-tocoferol por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) com detecção no visível/fluorescente e eluição isocrática foi otimizado e validado. O método consiste de extração líquido-líquido rápida e simples e posterior quantificação do sobrenadante extraído por HPLC. Alíquotas de plasma foram estocadas a –20°C por três meses para estudo da estabilidade. Aplicação metodológica foi realizada em amostras fornecidas por pintores e indivíduos não expostos a tintas (n = 75). O ensaio foi linear para todas as vitaminas analisadas (r > 0,99). Precisões intradia e interdia apresentaram coeficiente de variação (CV) menor que 5%. Exatidões variaram de 0,29 a –5,80% e recuperações entre 92,73 e 101,97%. Amostras de plasma e sobrenadante extraído foram estáveis por até 60 dias a –20°C. Foi demonstrada uma diminuição significativa nas concentrações de licopeno, β-caroteno e retinol em indivíduos expostos quando comparados com os não-expostos (p 0.99). Intra- and inter-run precisions were obtained with coefficient of variation smaller than 5%. The accuracies ranged from 0.29 to –5.80% and recoveries between 92.73 and 101.97%. Plasma samples and extracted supernatants were stable for 60 days at –20°C. A significant decrease of lycopene, β-carotene and retinol concentrations in plasma from exposed individuals compared to non-exposed individuals (p < 0.05) was observed. The method is simple, reproducible, precise, accurate and sensitive, and can be routinely utilized in clinical laboratories