Verificación de una cepa microbiana del sedimento de la Laguna de San Antonio, Cantón Riobamba, Provincia de Chimborazo

En la presente investigación se realizó la verificación de la cepa microbiana de la Laguna de San Antonio, Cantón Riobamba, Provincia de Chimborazo, determinándose mediante pruebas de crecimiento en caldos nutritivos y agares específicos si la cepa microbiana objeto de estudio (L3) correspondía a la bacteria Xenorhabdus nemathophilys, de característica Gram-, que previamente fue estudiada en otra investigacion. Se evaluó la presencia de UFC en cada medio utilizado, se realizó la secuenciación de la cepa microbiana aplicando la reacción en cadena polimerasa (PCR), para finalmente establecer la aplicabilidad del microorganismo definido en un proceso de Biorremediación. En la fase experimental se eligieron cuatro muestras al azar de la cepa L3, mismas que fueron activadas mediante la preparación de caldo nutritivo e incubadas a 35°C. Posteriormente para la masificación de las muestras activadas se prepararon tres tipos diferentes de medios de cultivo: Caldo nutritivo1, Caldo X, Caldo BHI, y para la siembra tres tipos de agares: Agar nutritivo, Agar MacConkey, Agar Eosin. Mediante el método de dilución y vertido en placa, se realizaron tres siembras de las cepas alimentadas en los diferentes medios de cultivo. Tras la incubación se realizó el conteo bacteriano en las cajas que presentaron mayor crecimiento y una vez finalizado, se realizó la purificación, ampliación y secuenciación mediante la PCR de las cepas bacterianas en el laboratorio Macrogen en Corea del Sur. Conociendo las características previas mediante revisión documentada de Xenorhabdus nematophilys, y al observar el comportamiento de la bacteria en cada medio utilizado, que no concordaba con lo que se conocía acerca de la misma, era imprescindible recurrir al análisis de secuenciación genética en PCR para confirmar datos. Los resultados determinaron la presencia de dos tipos de bacterias Gram+: Bacillus pumilus y Bacillus altitudinis, distintas a la especie estudiada, lo que concluye que la identificación de consorcios bacterianos puede ser validada únicamente por este tipo de procedimientos y análisis. La aplicabilidad de los microorganismos encontrados mediante secuenciación genética: Bacillus pumilus y Bacillus altitudinis son específicamente como control biológico, fungicidas e insecticidas, los mismos que pueden ser aplicados en procesos de biorremediación.The verification of the microbial strain of Laguna de San Antonio, Cantón Riobamba, Chimborazo Province was carried out in this investigation, being determined by growth tests in nutrient broths and specific agars if the microbial strain under study (L3) corresponded to the bacterium Xenorhabdus nematophilys, of Gram- characteristic, which was previously studied in other research. The presence of Colony- forming unit (UFC) was evaluated in each means used; the sequencing of the microbial strain was conducted using the polymerase chain reaction (PCR), to finally establish the applicability of the microorganism defined in a bioremediation process. Four samples at random were chosen in the pilot phase from the L3 strain, which were activated by preparing nutrient broth and incubated at 35°C. Subsequently three different types of culture media were prepared for the overcrowding of the activated samples: Nutrient broth 1, Broth X, Broth BHI, and for sowing, three types of agars: Nutrient Agar, MacConkey Agar, and Eosin Agar. Also three sowings of feeding strains were made in the different culture media using the dilution and Pour plate method. The bacterial counting was carried out after the incubation in the boxes which showed a greater growth, and the purification, enlargement and sequencing were performed once completed the process using the PCR of the bacterial strains at Macrogen laboratory in South Korea. Knowing the previous features by documented review of Xenorhabdus nematophilys, and observing the behavior of the bacterium in each medium, which was not cosistent with what was known about it, it was imperative to resort to the analysis of genetic sequencing in PCR to confirm data. The results showed the presence of two types of Gram+ bacteria: Bacillus pumillus and Bacillus altitudinis, different from the species under study, which concludes that the identification of bacterial consortiums can be validated only by this type of procedures and analysis. The applicability of microorganisms found through genetic sequencing: Bacillus pumillus and Bacillus altitudinis are specifically as biological control, fungicides and insecticides, the same that can be applied in bioremediation processe