Detección del virus de la leprosis de los cítricos tipo citoplasmático en los Llanos Orientales de Colombia

Symptoms of citrus leprosis were observed during 2004 - 2005 in the East plains of Colombia, Departments of Meta and Casanare. To identify the causal agent, CORPOICA collected leaves of Valencia sweet orange exhibiting typical lesions of leprosis from several locations in the Departments of Casanare (Yopal, Aguazul) and Meta (Guamal, Villavicencio and Cumaral). Virus identification was done by RT-PCR and transmission electron microscopy (TEM). Ten of the 21 samples examined by TEM resulted positive to the leprosis virus (Citrus Leprosis Virus, CiLV-C). Short bacilliform particles characteristic of CiLV-C were found in the endoplasmic reticulum, and irregularly shaped viroplasms were present in the cytoplasm. Fourteen of the 32 samples processed by RT-PCR were positive to CiLV-C. RT-PCR analyses amplified cDNA fragments of expected size for samples collected in Meta. One of the amplifications was sequenced (GenBank accession No. DQ272491) and found to have 98% nucleotide sequence identity to the Brazilian CiLV-C isolate (GenBank accession No. AY289190.1). Sequence and primers were provided to ICA for CiLV-C diagnosis in Colombia. Mites collected from affected plants were identified as Brevipalpus phoenicis (Geijskes), one of the most important vectors of CiLV-C. Durante los años 2004 y 2005 se observaron síntomas de la leprosis de los cítricos en los departamentos de Meta y Casanare. Para confirmar la causa de esta sintomatología, se colectaron hojas de naranja ‘Valencia’ con lesiones típicas en municipios de Casanare (Yopal y Aguazul) y Meta (Guamal, Villavicencio y Cumaral). Las muestras fueron procesadas identificar el virus por medio de microscopía electrónica de transmisión (MET) y transcripción reversa - reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). Diez de las 21 muestras analizadas por MET resultaron positivas para el virus de la leprosis (Citrus Leprosis Virus, CiLV-C). En algunas muestras se observaron partículas baciliformes características del CiLV-C en el retículo endoplasmático y formas irregularles de viroplasmas en el citoplasma. Catorce de las 32 muestras procesadas por RT-PCR resultaron positivas al CiLV-C. Los análisis RT-PCR amplificaron fragmentos de cADN del tamaño esperado para las muestras colectadas en el Meta. Una de las ampliaciones fue secuenciada (GenBank accessión No. DQ272491) y la secuencia obtenida guarda identidad del 98% con la secuencia brasilera aislada de nucleótidos para CiLV-C (GenBank accessión No. AY289190.1). La secuencia obtenida y los primers fueron entregados al Instituto Colombiano Agropecuario —ICA— para el diagnóstico del virus CiLV-C en Colombia. Entre los ácaros recolectados en las plantas afectadas se identificó a Brevipalpus phoenicis (Geijskes) reconocido como principal vector de CiLV-C.