Identificación de antígenos de aislamientos colombianos de Giardia duodenalis reconocidos por IgG total y subclases.

Antigen profiles were described for Giardia duodenalis cysts and trophozoites that are recognized by IgG and its anti-G. dudodenalis subclasses (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4). Antigens were identified by Western blot from G. duodenalis cyst and trophozoite isolates. Cysts and trophozoites were each subjected to protein separation by SDS-PAGE. The proteins were then transferred to nitrocellulose membranes by electroimmunoblot, and their antigenicity was determined by exposing them to sera from patients with confirmed diagnosis of G. duodenalis infection. The antigen-antibody reaction was revealed by specific alkaline phosphatase antibody conjugates against IgG, IgG2, IgG3, IgG4: bands were visualized by addition of the substrate 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate and the stain nitro blue tetrazolium. The bands were read and analyzed by linear regression using Quantity One software. Thirty two antigens were simultaneously recognized by total IgG anti-G. duodenalis in the cyst and trophozoite stages. The antigens varied in molecular weight from 22 to 185 kDa. Nineteen antigens were identified by both IgG, and IgG3 anti-G duodenalis, with molecular weights ranging from 42 to 180 kDa. IgG2 and IgG4 did not identify any antigen in either stage. The antigens of molecular weights 27, 30, 31, 33, 45, 49, 57, 78, 89 and 170 kDa are shared with G. duodenalis isolates from other geographical regions of Colombia. The recognition of cyst and trophozoite antigens of Colombian G. duodenalis isolates by IgG, IgG1 and IgG3 anti-G. duodenalis suggested that they are involved in the induction of the host immune response.Se conocen investigaciones realizadas sobre la respuesta inmune humoral en giardiosis. Sin embargo, estudios sobre perfiles de antígenos de quistes y de trofozoítos de Giardia duodenalis reconocidos por IgG y subclases (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) anti-G. duodenalis no se han realizado en la misma magnitud. Con el fin de determinar los antígenos de los aislamientos colombianos de G. duodenalis reconocidos por IgG y sus subclases anti-G. duodenalis, se utilizó la metodología de Western blot. Quistes y trofozoítos del parásito, independientemente, se sometieron a separación de proteínas mediante SDS-PAGE. Las proteínas separadas fueron transferidas a membrana de nitrocelulosa mediante inmunoelectrotransferencia y su antigenicidad determinada confrontando éstas con IgG y sus subclases anti-G. duodenalis presentes en el suero de pacientes con giardiosis comprobada parasitológicamente. La unión antígeno-anticuerpo se detectó con conjugados anti-inmunoglobulina específicos unidos a fosfatasa alcalina, la cual permitió evidenciar los polipéptidos antigénicos cuando se adicionó el sustrato 5-bromo-4-cloro-3-indolil-fosfato/azul de nitrotetrazolio. Se leyeron y analizaron las bandas mediante análisis de regresión lineal, utilizando el programa Quantity One®. Se reconocieron 32 antígenos, simultáneamente en quistes y trofozoítos de aislamientos colombianos del parásito por IgG total anti-G. duodenalis, que oscilaron entre 22-185 kDa y 19 en un rango de 42 a 180 kDa, reconocidos tanto por IgG1 como por IgG3 anti-G. duodenalis. Las IgG2 e IgG4 anti-parásito no reconocieron antígenos en ninguno de los dos estadios. Los antígenos de 27, 30, 31, 33, 45, 49, 57, 78, 89 y 170 kDa son compartidos con aislamientos de G. duodenalis circulantes en otras regiones geográficas. El reconocimiento de antígenos de quistes y trofozoítos de los aislamientos colombianos de G. duodenalis por IgG, IgG1 e IgG3 anti-G. duodenalis de pacientes infectados sugiere que los antígenos del parásito originan respuesta inmune humoral en el hospedero