Stress oxydant au niveau des plaquettes sanguines humaines dans le contexte du diabète : étude du glutathion et de la glutathion peroxydase 4

Les plaquettes sanguines jouent un rôle prépondérant dans les complications cardiovasculaires chez le diabétique. En raison de lhyperglycémie, la glycosylation non enzymatique ou glycation des protéines est augmentée. Des travaux ont déjà mis en évidence la glycation de la glutathion peroxydase cytosolique (cGPx ou GPx1) plaquettaire chez les diabétiques de type 1 ce qui entraîne une diminution de lactivité enzymatique. De plus, la concentration plaquettaire du glutathion (GSH), est diminuée. Dans ce contexte, notre étude a porté sur deux antioxydants plaquettaires : le GSH et la « phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase » (PHGPx ou GPx4). Le rôle protecteur et détoxifiant du GSH résulte principalement de sa fonction de cosubstrat des GPxla GPx4 catalyse la réduction des hydroperoxydes lipidiques contenus dans les membranes. La finalité est dapporter ou de compléter des connaissances fondamentales sur léquilibre pro/antioxydant des plaquettes de diabétiques. Nous avons mis en évidence que le GSH peut être glyqué in vitroladduit formé nest plus cosubstrat de la GPx1, ce qui pourrait ainsi contribuer à la diminution des défenses antioxydantes que nous avons observée dans les plaquettes des diabétiques. Nous avons caractérisé la GPx4 plaquettaire et étudié sa localisation subcellulaire par une double approche (dosage enzymatique et immunodétection). La synthèse dun substrat spécifique de lisoforme 4 des GPx (les hydroperoxydes de phosphatidylcholine) et le dosage enzymatique plaquettaire ont été mis au point. Ceci a permis de mettre en évidence une activité GPx4 dans les plaquettes de sujets sains, distincte et fonctionnellement complémentaire de lactivité GPx1 déjà connue. Nous observons 83,5% de lactivité GPx4 totale plaquettaire dans le cytosol, et respectivement 8,9% et 7,6% dans les fractions membranaire et mitochondriale. Parmi plusieurs cosubstrats testés (dérivés du GSH et dithiol), le GSH reste le cosubstrat de la GPx4 le plus utilisé. Enfin, nous avons étudié le métabolisme lipidique et le statut pro/antioxydant des plaquettes sanguines dans le diabète. Malgré un bon contrôle glycémique et en absence de manifestations cliniques de complications cardiovasculaires, un stress oxydant est observé dans les plaquettes sanguines des diabétiques (augmentation du taux de MDA, diminution du taux d?-tocophérol et des activités GPx). Une augmentation du taux de TXB2 basal ainsi quune hyperagrégabilité ont été observées dans les plaquettes des diabétiques. La possibilité que lhyperactivité plaquettaire observée dans le diabète soit médiée, entre autres, par une augmentation de la libération dAA via une activation de la phospholipase A2 cytosolique est également discutée