Study of Genetic Polymorphism of Vitamin D Receptor BsmI, ApaI and CYP27B1 and CYP24A1 Genes and their relationship to serum levels of Vitamin D and Colorectal Cancer susceptibility

O câncer colorretal (CCR) é mundialmente, o terceiro mais comum entre homens e o segundo entre mulheres. Fatores genéticos, ambientais e doenças inflamatórias podem aumentar o risco de CCR, enquanto a Vitamina D é apontada como componente de efeito protetor juntamente com o cálcio. A principal via de produção desta vitamina ocorre com exposição da pele à luz solar, onde os precursores são transformados em pré-vitamina e transportados aos órgãos onde são convertidos em 25-OH Vitamina D (forma circulante) e posteriormente, em 1,25(OH)2 Vitamina D3 (forma ativa) pela CYP27B1. Ocorrendo metabolização pela CYP24A1, a Vitamina D ativa se liga ao seu receptor (VDR) e levada ao meio intracelular, liga-se a sequências específicas de DNA, onde polimorfismos dos VDR interferem na absorção intestinal de cálcio. Objetivos: Investigar a relação entre os polimorfismos dos VDR BsmI, ApaI e dos genes CYP27B1 e CYP24A1 aos níveis séricos da vitamina D, assim como o estilo de vida e hábitos alimentares ao risco de desenvolvimento de CCR. Métodos: Foram incluídos 152 pacientes com de CCR, e 321 indivíduos sem câncer (grupo controle). Todos os indivíduos foram submetidos a um questionário sobre hábitos alimentares, etilismo e tabagismo, análise de prontuário e a coleta de sangue periférico para extração do DNA genômico e avaliação do nível sérico de Vitamina D por HPLC. Os polimorfismos estudados foram investigados pela a técnica de PCR e a genotipagem por RFLP e sequenciamento genético. O teste Exato de Fisher, T-Student, ANOVA, correlação de Pearson, sobrevida pelas curvas de Kaplan-Meier e teste de Log-Rank foram realizados para obtenção dos resultados, assim como as análises uni, mutlivariadas e ponderadas. Os valores de p <0,05 foram considerados estatisticamente significantes. Resultados: A média de idade nos grupos foi de 62,8 anos. O baixo ou nulo consumo de frutas, cereais, leite e derivados, bem como o tabagismo e etilismo foram associados a maior risco de CCR. A sazonalidade alterou as médias dos níveis séricos de Vitamina D circulante e quando realizada análise estatística ponderada, os indivíduos com status de deficiência, tiveram maior risco de CCR. Não houve associação entre sobrevida e as variantes genéticas estudadas e as dosagens dos níveis séricos de Vitamina D. Em ApaI, o genótipo heterozigoto Aa ou a associação aa+Aa aumentou o risco de CCR; porém para BsmI, os resultados não foram estatisticamente significantes. Após análise multivariada, foram associados a maior risco de CCR o heterozigoto e a associação AT+AA do rs6013897; os genótipos CT e CC do rs158552 e a associação CT+CC de CYP24A1 e para CYP27B1, o heterozigoto GT e a associação GT+TT do rs10877012. Conclusões: Foram associados ao risco de CCR, fatores ambientais como hábitos alimentares e estilo de vida, alguns dos polimorfismos (VDR ApaI, SNPs rs6013897, rs158552 e rs10877012) estudados e o perfil de deficiência de Vitamina D circulante. Não foram associadas à sobrevida as dosagens da Vitamina D e as variantes genéticas. As médias dos níveis séricos da Vitamina D e o risco de CCR sofreram interferências externas e intrínsecas, prejudicando a síntese e metabolismo desta vitamina.Worldwide, colorectal cancer (CRC) is the third most common cancer among men and the second among women. Genetic, environmental and inflammatory diseases may increase the risk of CRC, while vitamin D is indicated as protective effect of component along with calcium. The major source of production of this vitamin occurs with exposing the skin to sunlight, where the precursors are transformed into pre-vitamin and transported to the organs where they are converted to 25-OH Vitamin D (current form) and later, at 1.25 (OH) 2 vitamin D3 (active form) by CYP27B1. After metabolized by CYP24A1, the active vitamin D binds to its receptor (VDR) and loaded to the intracellular and binds to specific sequences of DNA, where the polymorphism of VDR interfere with intestinal absorption of calcium. Objectives: To investigate the relationship between polymorphisms of VDR BsmI, ApaI and CYP27B1 and CYP24A1 genes to serum vitamin D levels, as well as the lifestyle and eating habits to the risk of CRC development. Methods: We included 152 patients with CRC, and 321 subjects without cancer (control group). All subjects answered a questionnaire to investigate eating habits, alcoholism and smoke. Medical record were analyzed and peripheral blood were collected for genomic DNA extraction and assessment of serum levels of Vitamin D by HPLC. Polymorphisms were studied by PCR and genotyping by RFLP and genetic sequencing. Fisher's exact test, t-Student, ANOVA, Pearson correlation, survival by Kaplan-Meier and log-rank tests were performed to analyze the results, as well as univariate, mutlivariate and weighted. P values