Adana ve Mersin illerinde domates lekeli solgunluk virüsü (tomato spotted wilt virus, TSWV)'nin değişik yöntemlerle saptanması

TEZ5770Tez (Yüksek Lisans) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2006.Kaynakça (s. 59-65) var.ix, 72 s. : rnk. ; 29 cm.The objectives of this study are purification and biological, serological and molecular detection of TSWV in tomatos and peppers growing in Adana and Mersin provinces between 2005 and 2006. Collected samples were firstly tested with ELISA and infection ratio was determined as 45.4%. TSWV positives were coded and used for mechanical inoculation. The symptoms were observed on E8, D2 and M5 isolates inoculated test plants in 5-15 days however, T1 inoculated ones showed in 1-2 months after TSWV inoculation. Only one protein of TSWV was observed in SDS-PAGE and molecular weight of it was estimated as 27 kDa. Centrifugation method was succesfully used for semi purification of TSWV. Column chromatography and PEG precipitation methods were not be successed for TSWV purification. TSWV virions were purified and four bands were obtained in SDS-PAGE and one band in agarose gel electrophoresis. Total RNA extraction was done from infected test plants and used for RTPCR method. DNA bands were observed in respected sizes after the PCR products were tested in agarose gel electrophoresis.Bu çalışma, Adana ve Mersin illerinde yetiştirilen domates ve biberlerde zararlı Domates Lekeli Solgunluk Virüsü (Tomato Spotted Wilt Virus, TSWV)'nin saflaştırılması, biyolojik, serolojik ve moleküler yöntemler kullanılarak tanısının yapılması amacıyla 2005-2006 yılları arasında yürütülmüştür. Araziden toplanan virüslü olduğundan şüphelenilen bitkiler, öncelikle ELISA yöntemi ile testlenmiş ve hastalık oranı % 45.4 olarak hesaplanmıştır. TSWV ile infekteli olan örnekler kodlanarak, mekanik inokulasyon çalışmalarında kullanılmıştır. E8, D2, M5 kodlu izolatlar ile aşılı bitkilerde 5-15 gün içerisinde simptom gözlenmiş, bununla birlikte T1 izolatı ise, 30-60 gün gibi bir sürede simptom çıkışına neden olmuştur. SDS-PAGE'de virüse ait bir protein band gözlenmiş ve molekül ağırlığı 27 kDa olarak saptanmıştır. TSWV, santrifüjleme yöntemi kullanılarak yarı saflaştırılmış, PEG çöktürme ve kolon kromotogrofisi yöntemleri başarılı olmamıştır. TSWV virionları saflaştırılmış ve SDS-PAGE'de dört band, agarose jel elektroforez'de ise tek band gözlenmiştir. TSWV ile infekteli test bitkilerinden total RNA ekstraksiyonu yapılmış ve bunlar RT-PCR yönteminde kullanılmıştır. PCR ürünleri agarose jel elektroforez ile test edilmiş ve beklenen band büyüklükleri gözlenmiştir.Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi Tarafından Desteklenmiştir. Proje No:ZF2005YL1