Etude fonctionnelle de la protéine M2-1 du virus respiratoire syncytial à l'aide d'un miniréplicon en cellules eucaryotes

Le virus respiratoire syncytial (VRS) est le principal agent responsable de maladies respiratoires graves (bronchiolites, pneumonies) chez l’Homme (nouveau-nés, personnes âgées ou immunodéprimées). En l’absence de vaccins efficaces contre ce virus, le développement rationnel de traitements antiviraux constitue un enjeu de taille. Appartenant à la famille des Paramyxoviridae, le VRS est un virus enveloppé dont le génome est constitué d’un ARN simple brin de polarité négative, codant pour 11 protéines. Le génome est répliqué et transcrit par le complexe ARN polymérase dépendante de l’ARN viral. Ce complexe est composé de la nucléoprotéine N, de la polymérase L, de la phosphoprotéine P et du facteur de transcription M2-1 qui assure la processivité de la polymérase au cours de la transcription virale. Le complexe polymérase, ne présentant pas d’équivalent dans la cellule, constitue une cible privilégiée pour le développement d’inhibiteurs. Une meilleure compréhension des mécanismes d’interaction entre les protéines du complexe polymérase est donc indispensable afin d’identifier des cibles potentielles. Le groupe de John N. Barr (Leeds University, UK) a résolu la structure cristalline tridimensionnelle de la protéine M2-1, dans sa forme tétramérique avec une résolution de 2,5Å. Nous nous sommes associés à ce laboratoire afin étudier le rôle fonctionnel de certains résidus de la protéine M2-1. Le rôle critique de certains résidus a été abordé par mutagenèse dirigée et l’utilisation d’un miniréplicon accompagné d’un contrôle d’expression par western blotting des protéines mutées. Nous avons notamment montré l’importance de deux résidus Serine phosphorylables pour l’activité de M2-1 en tant que facteur de transcription