Análise do efeito de quimioterápicos em Chrysomya megacephala (Diptera : Calliphoridae)

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2017.Uma das principais aplicações da entomologia forense médico-legal é a estimativa do intervalo pós-morte (IPM). Entretanto, certas substâncias químicas presentes em um cadáver podem interferir no desenvolvimento dos insetos que se alimentam dele, sendo importante conhecer estes efeitos para uma estimativa mais precisa do IPM. Entomotoxicologia é o ramo da entomologia forense que estuda o uso de insetos necrófagos na detecção e análise de drogas e outras substâncias em tecidos em decomposição, além de investigar seus possíveis efeitos no desenvolvimento destes artrópodes. Sendo assim, o objetivo principal deste trabalho foi investigar o impacto dos quimioterápicos ciclofosfamida (CF) e metotrexato (MTX) no desenvolvimento pós-embrionário de Chrysomya megacephala. Para isso, foram feitos experimentos in vitro com diferentes concentrações destas drogas incorporadas em carne bovina moída, simulando as dosagens injetadas em humanos que passam por quimioterapia. Foram feitos cinco tratamentos para a alimentação das larvas em cada experimento, sendo um controle negativo (água destilada). Para a CF foram utilizadas ½ Dose inicial intravenosa - DIIv (25 mg/kg), 1 DIIv (50 mg/kg), 2 DIIv (100 mg/kg) e 4 DIIv (200 mg/kg); e para o MTX foram utilizadas ½ Dose Inicial Intraperitoneal - DIIp (5 mg/kg), 1 DIIp (10 mg/kg), 2 DIIp (20 mg/kg) e 4 DIIp (40 mg/kg). Todos os tratamentos foram realizados em triplicata e mantidos a 25°C em estufa BOD. A cada 12 horas eram retiradas três larvas de cada tratamento, sacrificadas e o comprimento total de cada uma era medido com auxílio de um paquímetro digital, até o abandono da dieta para pupariação. Foi também realizado um experimento a parte sem manipulação das larvas para calcular as taxas de sobrevivência larval e total para cada tratamento, além da proporção sexual das moscas emergidas. ANOVA e teste Tukey foram realizados para comparar o efeito das drogas sobre o desenvolvimento de C. megacephala. Os resultados indicaram claramente que ambos os medicamentos afetaram o desenvolvimento e sobrevivência de C. megacephala, porém de forma heterogênea. Além disso, houve um desvio da razão sexual esperada nas larvas expostas ao MTX, emergindo uma quantidade significativamente maior de fêmeas do que machos. Estes fatores de interferência negativa devem ser considerados em casos de morte suspeita de pessoas que faziam uso destes medicamentos para que não haja uma subestimativa de IPM.Abstract : One of the main applications of medico-legal forensic entomology is the estimation of the postmortem interval (PMI). However, certain chemical substances present in a cadaver can interfere in the development of the insects that feed on it, thus it is important to know these effects for a more accurate estimation of PMI. Entomotoxicology is the branch of forensic entomology that studies the use of scavenger insects in the detection and analysis of drugs and other substances in decomposing tissues, in addition to investigating their possible effects on the development of these arthropods. Therefore, the main purpose of this work was to investigate the impact of the chemotherapeutic drugs cyclophosphamide (CF) and methotrexate (MTX) on the post-embryonic development of Chrysomya megacephala. For this, in vitro experiments were performed with different concentrations of these drugs incorporated in minced beef, simulating the dosages injected in humans that undergo chemotherapy. Five treatments were done to feed the larvae in each experiment, with one as a negative control (distilled water). For CF, ½ initial intravenous dose - DIIv (25 mg/kg), 1 DIIv (50 mg/kg), 2 DIIv (100 mg/kg) and 4 DIIv (200 mg/kg) were used; and for MTX ½ Initial Intraperitoneal Dose - DIIp (5 mg/kg), 1 DIIp (10 mg/kg), 2 DIIp (20 mg/kg) and 4 DIIp (40 mg/kg) were used. All treatments were performed in triplicate and maintained at 25°C in a BOD chamber. At every 12 hours three larvae of each treatment were removed, sacrificed and the total length of each one was measured with the aid of a digital caliper until the abandonment of the diet for pupariation. A separate experiment without manipulation of the larvae was also performed to calculate the larval and total survival rates for each treatment, in addition to the sex ratio of the emerged flies. ANOVA and Tukey test were performed to compare the effect of drugs on the development of C. megacephala. The results clearly indicated that both drugs affected the development and survival of C. megacephala, but in a heterogeneous manner. In addition, there was a deviation in the expected sex ratio in MTX-exposed larvae, with significantly more females than males emerging. These negative interference factors should be considered in cases of suspected death of people using these drugs so that there is no underestimation of PMI