Validación y desarrollo de un sistema de vitrificación completamente cerrado en el modelo animal de ratón

Objetivo: Evaluar en el modelo animal (ratón) la eficiencia de un nuevo sistema de vitrificación cerrado (Cryotop C), desarrollado a partir de un dispositivo de vitrificación de sistema abierto (Cryotop®) ya existente. Materiales y Métodos: inicialmente se llevó a cabo el diseño del dispositivo cerrado de vitrificación, así como se elaboró el protocolo de vitrificación y desvitrificación adecuado para el mismo. El desarrollo del sistema cerrado en la presente tesis doctoral se ha realizado partiendo del diseño previo del Cryotop SC®. Y una vez obtenido, y para su validación, se ha utilizado el Cryotop® como soporte referente. Una vez realizado el desarrollo, se han establecido 3 grupos experimentales I) Grupo Cryotop; II) Grupo Cryotop C y III) Grupo Control. Se han realizado un total de 4 experimentos diferenciados: 1) Evaluación de supervivencia y desarrollo utilizando Cryotop SC de ovocitos de ratón. 2) Evaluación de supervivencia y desarrollo utilizando Cryotop C en ovocitos y embriones de ratón. 3) Evaluación del impacto sobre el huso meiótico tras vitrificación con Cryotop C de ovocitos de ratón. 4) Análisis de la descendencia y generación tras transferencia de blastocistos vitrificados con Cryotop C. Resultados: no se han obtenido diferencias estadísticamente significativas en término de supervivencia al comparar Cryotop abierto con Cryotop C para ovocitos (100.0% vs. 97.7%), zigotos (100.0% vs. 100.0%) y blastocistos (98.3% vs 96.7%). No obstante, sí se ha encontrado una disminución en la tasa de llegada a estadio de blastocistos en ovocitos vitrificados con Cryotop C (82.0%), respecto al Cryotop (63.3). Tampoco se han encontrado diferencias estadísticamente significativas entre ambos grupos de vitrificación en cuanto a alteraciones en el huso meiótico y anormalidades en alineamiento cromosómico, pero si de ambos respecto al grupo control. En cuanto a descendencia, no se encontraron diferencias en los tres grupos experimentales. Conclusiones: el descenso en la tasa de enfriamiento consecuencia del uso de un sistema cerrado de vitrificación no tiene un impacto negativo en términos de supervivencia en ovocitos, zigotos y blastocistos de ratón. No obstante se observa una disminución en el desarrollo a estadio de blastocisto desde ovocitos. Tampoco se observa afectación en la integridad del huso meiótico ni en la descendencia procedente de transferencia de blastocistos vitrificados con el Cryotop C. Sería necesario posteriores estudios de validación en ovocitos y embriones humanos, para conocer el posible uso en la clínica diaria