Implementación de la metodología para la determinación cuantitativa de carboxihemoglobina por espectrofotometría UV-VIS en muestras de interés forense (sangre)

Introducción: En Colombia las intoxicaciones por monóxido de carbono, tanto suicidas como accidentales, son frecuentes en toxicología forense. Esta intoxicación está asociada con la combustión incompleta de materiales que contengan carbono; generalmente la intoxicación se produce por diversas fuentes de exposición como gases de escape de vehículos, humos de incendios, combustión incompleta de estufas de carbón, gasolina o keroseno, cigarrillo. Objetivo: Implementar la metodología de análisis rutinario de COHb mediante la técnica de espectrofotometría UV-VIS teniendo en cuenta los parámetros de precisión y linealidad, estableciendo la correlación entre la concentración de monóxido de carbono y la respuesta instrumental. Materiales y métodos: Existen diferentes métodos descritos en la literatura para determinar carboxihemoglobina (COHb) en sangre. En el laboratorio se compararon tres metodologías para analizar COHb por espectrofotometría UV-VIS en muestras de sangre: Saturación de oxihemoglobina con H2O2 y KMnO4 y COHb con CH2O2 y H2SO4. La primera metodología se empleó saturando muestra de sangre total; la segunda saturando la muestra de sangre previamente diluida con hidróxido de amonio acuoso (0.1%), en la tercera metodología se saturó sangre total con aire para la obtención de COHb al 0%. Resultados: Se analizaron tres curvas de calibración correspondientes a cada metodología con muestras de sangre de personas vivas como control positivo. Los resultados de las tres metodologías muestran una tendencia lineal al existir correlación significativa entre la absorbancia y la concentración a un intervalo de confianza del 95%. El modelo lineal para ser utilizado de forma rutinaria se expresa por la ecuación Y= 0.1064x + 0.8714 (metodología 1) donde Y es la relación de absorbancias a 538nm y 568nm y X el % de saturación de COHb. Esta metodología arroja un coeficiente de correlación de 0.999. Los resultados mostraron una buena precisión con un CV menor al 1%. Conclusiones: La implementación de la metodología, se logró gracias a la obtención segura de la saturación de monóxido de carbono y oxihemoglobina. Al saturar la muestra de sangre se debe tener en cuenta el lavado de gases ya que se observa deterioro de la hemoglobina cuando se inyecta directamente el gas a la muestra