Identificación molecular de consorcios bacterianos resistentes a metales pesados provenientes de aguas residuales de una industria hidrocarburífera en la provincia de Esmeraldas-Ecuador

In this paper resistant bacterial consortia to metals were molecularly identified, isolated from wastewater of a hydrocarbon industry in the province of Esmeraldas. Samples were inoculated in four culture media and metal susceptibility testing was performed considering TULAS`s maximum discharge limits: cadmium (0.2, 2 and 20 ppm), chromium (2, 25 and 50 ppm) and lead (2, 10 and 20 ppm). Metal removal rate was evaluated by spectrophotometric for cadmium, chromium and lead and arsenic removal by Lovibond kit Arsenic Test (highly sensitive) No. 400700. Five consortiums were isolated, where three showed a significant percentage of metals removing activity: ReO3As1 (20.78%), ReO6Cr1 (2) A (21%) and Re04Pb2 (1) A (22.49%). For molecular identification DNA was extracted using the method proposed by Ausubel, then the samples were sent to Macrogen-Korea, where the sequencing of new generation was performed, obtaining genomic libraries of fragments of the region of the 16S rRNA gene, amplicons were generated with a size of 600 bp and the sequencing was performed with the GS FLX Titanium equipment. The pyrograms formed were analyzed using the Roche GS FLX software (v 3.0) program. The identification was performed with the BLAST program. The three consortiums submitted belonging individuals to the genus Pseudomonas (Query Cover 99% and Ident 98%) and Staphylococcus (Query Cover 100% and Ident 99%). There was not possible identify species. These bacterial genera found have previously proved their effectiveness in environmental bioremediation processes.En el presente trabajo se identificó molecularmente consorcios bacterianos resistentes a metales, aislados de aguas residuales de una industria hidrocarburífera en la provincia de Esmeraldas. Las muestras fueron inoculadas en cuatro medios de cultivo y se realizó pruebas de sensibilidad a metales, considerando los límites máximos de descarga establecidos en el TULAS: cadmio (0,2, 2 y 20 ppm), cromo (2, 25 y 50 ppm) y plomo (2, 10 y 20 ppm). El porcentaje de remoción del metal se evaluó a partir de espectrofotometría para cadmio, cromo y plomo y la remoción de arsénico mediante el kit Lovibond Test Arsénico (altamente sensible) No. 400700. Se aislaron cinco consorcios, de los cuales tres presentaron un porcentaje de remoción significativo: ReO3As1 (20,78%), ReO6Cr1(2)A (21%) y Re04Pb2(1)A (22,49%). Para la identificación molecular se extrajo ADN utilizando el método propuesto por Ausubel, posteriormente se enviaron las muestras a Macrogen-Korea, donde se realizó el secuenciamiento de nueva generación, obteniéndose librerías genómicas de los fragmentos de la región del gen 16S ARNr, se generaron amplicones con un tamaño de 600 pb y se realizó la secuenciación con el equipo GS FLX Titanium. Los pirogramas formados fueron analizados mediante el programa Roche GS FLX software (v 3.0). La identificación se realizó con el programa BLAST. Los tres consorcios presentaron individuos pertenecientes a los géneros Pseudomonas (Query Cover 99% e Ident 98%) y Staphylococcus (Query Cover 100% e Ident 99%). No se consiguió identificar especies. Estos géneros bacterianos encontrados han demostrado previamente su eficacia en procesos de biorremediación ambiental