Avaliação in vitro da ação citotóxica de Cecropia pachystachya Trécul, embaúba

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2016.O câncer é uma das maiores causas de mortes no mundo sendo responsável por aproximadamente 13% da mortalidade global. No Brasil, as estimativas para 2016 apontam para a ocorrência de 600 mil novos casos, sendo de grande relevância a pesquisa e o desenvolvimento de novos medicamentos antineoplásicos. Ao examinar a origem dos medicamentos usados no tratamento do câncer, grande parte deles foi desenvolvido a partir de fontes naturais, destacando-se os compostos triterpênicos, com elevado potencial terapêutico. No presente trabalho, investigou-se os efeitos citotóxicos de extratos e frações de Cecropia pachystachya, frente a linhagens celulares tumorais humanas, e investigou-se o mecanismo de indução de morte celular da amostra mais ativa. Dentre as amostras avaliadas, destacou-se a fração orgânica (FO) obtida a partir do extrato bruto, a qual demonstrou citotoxicidade relevante para a linhagem de câncer de próstata PC-3. Assim, a FO foi submetida a técnicas cromatográficas para enriquecimento do seu conteúdo triterpênico, dando origem à fração enriquecida em triterpenos (FET), que apresentou valor de CC50 de 65,37 µg/mL para a linhagem PC-3 e foi submetida a uma série de experimentos a fim de elucidar o seu mecanismo de indução de morte celular. A avaliação das alterações morfológicas nucleares demonstrou aumento na população de células com núcleos grandes e regulares, sugerindo a indução de senescência, corroborada pela superatividade da ß-galactosidase. Ademais, houve diminuição no número de células viáveis capazes de formar colônias e decréscimo de sua capacidade de duplicação após o tratamento. Foi observada extensa vacuolização do citoplasma, não relacionada com autofagia ou paraptose. Em relação ao ciclo celular, houve diminuição das células na fase G1 e aumento em sub G0/G1. Os ensaios para avaliação da apoptose não demonstraram participação relevante desse tipo de morte. Entretanto, o potencial de membrana mitocondrial sofreu diminuição, não havendo a participação de EROs na citotoxicidade induzida. O mesmo tratamento não inibiu a migração das células PC-3, e as mesmas readquiriram capacidade proliferativa. Em conclusão, os resultados obtidos demostraram o potencial citotóxico in vitro da fração enriquecida em triterpenos (FET). Desta forma, serão avaliados, oportunamente, os efeitos citotóxicos dos triterpenos majoritários a serem isolados da FET, a fim de se confirmar seu potencial citotóxico.Abstract : Cancer is a major cause of death worldwide, responsible for approximately 13% of global mortality. In Brazil, the estimates in 2016 indicate the occurrence of 600,000 new cases, highlighting the importance of research and development of new anticancer drugs. By examining the source of drugs used in cancer treatment, most of them were developed from natural sources, where the triterpenic compounds stand out, with great therapeutic potential. In this study, we investigated the cytotoxic effects of extracts and fractions of Cecropia pachystachya, against human tumor cell lines and investigated the mechanism of cell death induction of the most active sample. Among the samples, the organic fraction (OF) obtained from the crude extract stood out, showing significant cytotoxicity for the PC-3 prostate cancer cell line. Based on these results, the OF was subjected to chromatographic techniques for enrichment of its triterpene content giving rise to the enriched-triterpenes fraction (ETF), which showed CC50 value of 65.37 mg/mL for PC-3 lineage and was subjected to a series of experiments in order to elucidate its cell death mechanism of action. The assessment of nuclear morphology demonstrated an increase of cells with large and regular nuclei, suggesting senescence induction, supported by the overexpression of ß-galactosidase. Furthermore, there was a decrease in the number of viable cells able to form colonies and of its duplication capacity after treatment. It was observed extensive cytoplasmic vacuolization, unrelated to autophagy and paraptosis. Regarding the cell cycle, there was a reduction of cells in G1 phase and an increase in sub G0/G1. Apoptosis evaluation did not show significant participation of this type of cell death. However, there was a decrease in mitochondrial membrane potential, without the participation of ROS in induced cytotoxicity. The same treatment did not inhibit the migration of PC-3 cells, and they reacquired their proliferative capacity. The results showed the in vitro cytotoxic potential of a fraction enriched with triterpenes (ETF) obtained from C. pachystachya. Therefore, the cytotoxic effects of triterpenes isolated from ETF will be evaluated opportunely in order to confirm their cytotoxic potential