Diagnosis of Venezuelan Equine Anaplasmosis by Polymerase Chain Reaction

La anaplasmosis, causada por Anaplasma phagocytophilum es una zoonosis que además de afectar al hombre, puede provocar enfermedad en caballos (Equus caballus), burros (Equus africanus asinus), grandes y pequeños rumiantes (Bos taurus, Ovis aries, Capra aegagrus hircus), perros (Canis lupus familiaris), gatos (Felis catus), primates no humanos (Macaca mulatta, Papio spp.), aves (Turdus merula, Erithacus rubecula, Fringilla coelebs), cerdos silvestres (Sus scrofa) y llamas (Lama glama). En los laboratorios nacionales, el diagnóstico de A. phagocytophilum se lleva a cabo mediante la observación a través del microscopio de luz en frotis de capa blanca teñidos, de cuerpos iniciales y/o mórulas intracitoplasmáticas en neutrófilos y eosinófilos. Esta prueba, aunque sencilla de realizar, es muy limitada por su baja sensibilidad y especificidad. La anaplasmosis equina no ha sido adecuadamente diagnosticada y caracterizada en Venezuela, poco se conoce acerca de su epidemiología, su prevalencia, diversidad y patogenicidad de cepas venezolanas, su distribución geográfica o sobre sus vectores más comunes. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar la presencia de A. phagocytophilum en poblaciones equinas venezolanas mediante el uso de la prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En la presente investigación se utilizó una prueba de PCR especie-específica con cebadores que amplifican un fragmento de 550 pb del gen que codifica la proteína de superficie P44. Se demostró por PCR, así como por frotis de capa blanca, la ausencia de A. phagocytophilum en doscientas muestras de sangre de ejemplares equinos sin signos aparentes de enfermedad, provenientes de diferentes regiones de la geografía nacional. Algunas de las posibles causas por las que no se encontraron casos positivos incluyen: el muestreo no coincidió con zonas geográficas endémicas asociadas a formas subclínicas de enfermedad; el exceso de ADNg del hospedador proveniente de la capa blanca pudo haber interferido con la amplificación del blanco de interés; condiciones epizootiológicas que no favorecieron la ocurrencia de la enfermedad, incluyendo habitat no propicio, ausencia de vectores y reservorios, y/o falta de una adecuada interacción entre hospedador-reservorio en las zonas exploradas.366-373mparragacomplete@gmail.comThe disease caused by Anaplasma phagocytophilum is a zoonosis, that affects not only humans, but also horses (Equus caballus), donkeys (Equus africanus asinus), large and small ruminants (Bos taurus, Ovis aries, Capra aegagrus hircus), dogs (Canis lupus familiaris), cats (Felis catus), non-human primates (Macaca mulatta, Papio spp), birds (Turdus merula, Erithacus rubecula, Fringilla coelebs), wild hogs (Sus scrofa) and lamas (Lama glama). National laboratories, the diagnosis of A. phagocytophilum is performed by examining stained buffy coat smears with light microscopy to detect initial bodies and/or intracitoplasmic morulas within neutrophils and eosinophils. This test is simple to perform, but it has limited sensitivity and specificity. Equine anaplasmosis has not been adequately diagnosed and characterized in Venezuela, so little is known about its epidemiology, its prevalence, the diversity and pathogenicity of Venezuelan strains, their geographic distribution or the most common vectors. The objective of the study was to use polymerase chain reaction (PCR) to screen for the presence of A. phagocytophilum in Venezuelan equine populations. The species-specific PCR test used primers would amplify a 550 bp fragment of the gene encoding the P44 surface protein. Surprisingly, neither the PCR test nor the buffy coat smears detected the presence of A. phagocytophilum in any of the two hundred blood samples from horses with no apparent signs of disease sampled from different geographic regions of Venezuela. Possible reasons for the failure to detect A. phagocytophilum include, the sampling did not comprise endemic areas associated with subclinical forms of the disease; excess of gDNA from the host buffy coat may have interfered with the amplification of the target of interest; and epizootiological conditions that did not favour disease occurrence, including unsuitable habitat patches, absence of vectors and reservoirs, and/or lack of an adequate host-reservoir interaction in the explored areas