Mecanismos genéticos de activación de vías de señalización celular en neoplasias mieloproliferativas crónicas BCR-ABL1 negativas

El objetivo principal de este trabajo consistió en determinar la causa molecular de un grupo de pacientes con diversas NMPCs que no presentaban las alteraciones genéticas más frecuentes encontradas en estas enfermedades. En concreto, nos centramos en la caracterización de alteraciones localizadas en genes codificantes de TKs y en otros genes implicados en su regulación, cuya alteración podría inducir un efecto similar al de la activación constitutiva de una TK. Los objetivos concretos fueron: 1. Realizar un análisis exhaustivo de la posible presencia de alteraciones génicas en los genes TK pertenecientes a las familias Abl (ABL1 y ABL2) y Syk (SYK y ZAP70) de CTKs y la familia IV (FGFR1, FGFR2, FGFR3 y FGFR4) de RTKs, en una serie seleccionada de pacientes sin fusión BCR-ABL1 ni mutación V617FJAK2. En todas las familias de genes seleccionadas, al menos uno de sus miembros se ha visto implicado previamente en la patogénesis de neoplasias ematológicas. Para ello: a. Analizaremos la presencia de posibles reordenamientos cromosómicos crípticos que afecten a los genes TK seleccionados mediante FISH. b. Analizaremos la presencia de posibles mutaciones activantes a nivel de secuencia mediante dHPLC en los exones codificantes de los principales dominios de estos mismos genes. Debido a su implicación en diversos tipos de tumores, en este estudio se incluyó el análisis de los dominios más importantes de EGFR (una RTK). c. Analizaremos posibles patrones de expresión anómalos de estos genes TK mediante RQ-PCR. 2. Realizar un análisis de toda la secuencia codificante de los genes de la familia de E3-ubiquitin ligasas Cbl (C-CBL, CBL-B y CBL-C) mediante dHPLC en la serie de pacientes anterior. En caso de detectarse alteraciones en alguno de estos genes, ampliaríamos el análisis de las regiones afectadas a un mayor número de muestras. En caso de detectar cambios posiblemente implicados en el desarrollo de la enfermedad en alguno de estos genes, realizaríamos ensayos funcionales in vitro para conocer el efecto de estas mutaciones en la proliferación celular