Caracterización del procesamiento del receptor de muerte DR6

DR6 es un receptor de muerte de la superfamilia TNFR, caracterizada por poseer dominios ricos en cisteína en su región extracelular. DR6 posee cuatro CRDs y una región espaciadora característica de este receptor situada entre los CRDs y la región transmembrana. Al igual que otros DRs, está descrito que DR6 es capaz de inducir apoptosis, aunque esto depende de la línea celular, así como de activar a JNK y a NF-kappaB. No obstante, se desconocen las vías de señalización que conducen a estas tres respuestas, así como su regulación. Recientemente se ha descrito que DR6 es procesado por la metaloproteasa MT1-MMP en células tumorales, y en nuestro laboratorio hemos determinado que el receptor expresado por células HEK293 transfectadas transitoriamente también es procesado proteolíticamente. En este estudio mostramos que el procesamiento de DR6 exógeno en las células HEK293 es parcialmente inhibido por GM6001 (un inhibidor general de metaloproteasas) a concentraciones hasta 10 veces más altas de las normalmente utilizadas. Además, si bloqueamos la activación de la metaloproteasa MT1-MMP mediante el inhibidor de furina II, no se detecta inhibición del procesamiento de DR6. Mediante RT-PCR demostramos que las células HEK293 no expresan MT1-MMP, confi rmando que esta metaloproteasa no está implicada en el procesamiento de DR6 en estas células. La deleción de la región espaciadora (aa 239-345) genera un receptor que no sufre procesamiento y que es funcional, ya que se comporta de forma similar al receptor completo en cuanto a la activación de JNK y NF-kappaB. También mostramos que DR6 endógeno es procesado en las células de carcinoma de pulmón A549 mediante un proceso que es dependiente de TNF, sin que se observe un aumento en la expresión ni del receptor ni de la MT1-MMP