F015 Role des fibroblastes cardiaques dans la tolérance des cardiomyocytes à l’ischémie reperfusion

ObjectifLes fibroblastes cardiaques sont la population cellulaire majoritaire du tissu cardiaque. Leurs possibles implications au cours de la séquence ischémie-reperfusion n’a jamais été étudiée. Le présent travail a donc pour but de déterminer si les fibroblastes sont impliqués dans une modulation de la cardioprotection.Matériel et MéthodesNous avons utilisé dans cette étude un modèle de cardiomyocytes de rats nouveau-nés soumis à une séquence d’ischémie-reperfusion simulées. Les cellules ont été isolées à partir de ventricules de rats nouveau nés. Les myocytes cardiaques ont été purifiés par attachements différentiels puis cultivés en présence d’un milieu de culture supplémenté en cytosine arabinoside (Ara C, 10μm). Les cardiomyocytes et les fibroblastes ont été cultivés séparément puis placés en contact direct (cultures mixtes) ou indirect (insert). Ces co-cultures ont subi une ischémie de 3H en absence de nutriments et d’O2 suivie d’une reperfusion de 20H en présence de nutriments et d’O2. Des tests de viabilité (test MTT) et de mortalité cellulaire (dosage de l’activité LDH et Troponine I) ont été effectués à la fin de la reperfusion.RésultatsNous avons montré qu’il était possible de simuler des séquences d’ischémie reperfusion et d’induire une souffrance cellulaire détectable pour une durée d’ischémie de 3H et de reperfusion de 20H. Dans les cultures mixtes (cardiomyocytes + fibroblastes), les tests MTT et LDH ont montré une amélioration de la viabilité cellulaire globale en comparaison avec la viabilité spécifique de chaque type cellulaire seul. Pour les cultures placées en insert, les tests MTT et Troponine I ont montré une amélioration de la viabilité des cardiomyocytes en présence des fibroblastes (p