Prevalencia y caracterización de la resistencia antimicrobiana en cepas Escherichia coli aisladas de ciervos y pequeños mamíferos

Resumen del trabajo presentado al XIX Congreso de la Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica, celebrado en Sevilla del 28 al 30 de mayo de 2015.[Introducción y objetivos]: Determinar la prevalencia de E. coli resistentes a los antimicrobianos (RA), y en especial cepas productoras de beta‑lactamasas‑espectro‑extendido (BLEE), en el tracto digestivo de mamíferos salvajes. Caracterizar y tipar molecularmente dichos aislamientos. [Material y métodos]: Se recogieron muestras fecales de 122 ciervos y 95 pequeños mamíferos [53 micromamíferos (12 Apodemus sylvaticus, 1 Crocidura russula, 40 Rattus rattus) y 42 conejos (Oryctolagus cuniculus)], procedentes del Parque Natural de los Alcornocales (Cádiz). Las muestras se inocularon en Agar Levine (AL) y BHI‑caldo con cefotaxima (CTX, 2 μg/ml) o imipenem (IMP, 2 μg/ml), con posterior pase a agar‑MacConkey suplementado con CTX o IMP. Los aislados se identificaron por métodos bioquímicos y moleculares (PCR uidA). Se determinó la sensibilidad a 14 antibióticos por método disco‑placa y los genes de resistencia asociados por PCR y secuenciación. Se analizaron los cambios aminoacídicos en GyrA y ParC. Se analizó la presencia de integrones y su estructura genética mediante PCR walking y secuenciación. Los grupos filogenéticos (GF) se determinaron por PCR‑triplex (chuA, yjaA, TSPE4.C2), y las cepas de especial interés se tiparon por multilocus‑sequence‑typing (MLST) y electroforesis en campos‑pulsados (ECP). [Resultados]: Se recuperaron 89 aislados E. coli de 84 de las 217 muestras analizadas en placas AL. El 89,9% presentó sensibilidad a todos los antibióticos (ciervos 89,6%; micromamíferos/conejos 91,7%). En una muestra de ciervo se aisló, tanto en placas AL como en suplementadas con CTX, una cepa productora de BLEE con resistencia asociada a quinolonas, cloranfenicol, tetraciclina y trimetoprim‑sulfametoxazol. La caracterización molecular de la misma reveló que portaba un integrón de clase 1 carente de la región 3’‑CS con una estructura inusual en E. coli: Intl1‑dfrA16–blaPSE‑1‑aadA2‑cmlA1‑aadA1‑qacH‑IS440‑sul3-orf1-mef(B)d‑IS26. La resistencia a cefalosporinas estuvo mediada por el gen blaCTX‑M‑1, flanqueado por orf477 aguas abajo. Esta cepa multirresistente perteneció al GF B1 y a la secuencia tipo ST224. Además, entre los aislamientos de E. coli estudiados, se detectaron 4 cepas resistentes a tetraciclina y 3 a ampicilina en ciervos y una cepa resistente a quinolonas en micromamíferos. La resistencia a tetraciclina estaba codificada por el gen tetA (3 cepas) y tetB (1 cepa). En los 2 aislados resistentes a quinolonas se obsevaron cambios aminoacidicos en GyrA (S83L, D87N) y ParC (S80I). La distribución de las cepas en los distintos GF varió en función del hospedador, siendo prevalente el grupo B1 en ciervos (51,9%) y conejos (80%). La ECP demostró la predominancia de determinados clones englobados dentro del GF B2 entre la población de ciervos (ST816) o roedores (ST104). [Conclusiones]: Este estudio muestra la alta sensibilidad antibiótica de las cepas de E. coli del intestino de mamíferos salvajes analizadas, lo que podría reflejar una baja presión selectiva en comparación con animales de producción y aves. Sin embargo, también en este ecosistema natural se ha detectado la presencia de E. coli productor de BLEE con un integrón inusual portador de genes de resistencia a antibióticos de uso clínico. El tipado molecular de la cepa BLEE aislada en ciervos indica que pertenece a la línea genética ST224, bien adaptada tanto al entorno clínico como ambiental.Peer Reviewe