Regulación y función de microRNAs en las alteraciones del testículo de ratón inducidas por exposición a mezclas de ftalatos y alquifenoles.

Los seres humanos y la vida animal están diariamente expuesta a mezclas de compuestos conocidos como perturbadores endocrinos (PEs), entre ellos destacan los ftalatos: [bis 2-etil-hexil ftalato (DEHP), dipentil ftalato (DBP), bencil-butil ftalato (BBP)] y los alquifenoles: [4-Nonilfenol (NP) y 4-terc-Octilfenol (OP)], por formar parte de la manufactura de productos de uso cotidiano, como plásticos y utensilios de limpieza, y liberarse de sus contenedores contaminando el medioambiente. Estos compuestos pueden alterar la homeostasis del sistema endocrino principalmente a nivel reproductivo, afectando la biosíntesis de testosterona o estrógenos. Dado que la producción de ambas hormonas controla la gametogénesis y la espermatogénesis la exposición a estos compuestos desde etapas muy tempranas del desarrollo gestacional, ha sido asociado a patologías reproductivas e infertilidad en los machos adultos. Los mecanismos por los cuales ejercen su acción aun son pocos conocidos. Sin embargo, involucran cambios en la expresión de transcritos que codifican proteínas importantes para el desarrollo y mantenimiento de la función testicular. En este aspecto toma relevancia el estudio de los microRNAs, que son RNAs pequeños no codificantes, que actúan como reguladores negativos de la expresión génica a nivel post-transcripcional. Sin embargo, se desconoce la participación de los microRNAs en las alteraciones testiculares inducidas por la exposición a mezclas de ftalatos y alquifenoles. Por ello, en esta tesis doctoral se planteó la hipótesis de “La exposición crónica a una mezcla definida de ftalatos y alquifenoles desregula los niveles de microRNAs, implicados en el balance testosterona/estrógenos lo cual afecta la fertilidad en ratones machos”. Para responder esta hipótesis, diseñamos en ratones un modelo de exposición crónica a una mezcla de los ftalatos DEHP, DBP y BBP en dosis de 0,3 mg/Kg/día cada uno y los alquifenoles NP y OP en dosis de 0,05 mg/Kg/día cada uno, estas dosis son equivalentes a los niveles de exposición en humanos. Esta mezcla fue administrada en el agua de ingesta de hembras preñadas desde el día 0,5 post-coitum hasta la adultez de las crías machos (60/75 días). Como grupo control a unos animales se les administro en el agua de bebida, únicamente los compuestos en que se diluyeron los ftalatos y alquifenoles. Nuestros principales hallazgos mostraron que, los testículos de ratones expuestos a la mezcla de ftalatos y alquifenoles, presentan una disminución en los niveles intratesticulares de estradiol vía cambios en los niveles de mensajero y proteínas de enzimas de la vía esteroidogénica (principalmente una disminución de aromatasa), alteraciones en la espermatogénesis y apoptosis de células germinales vía cambios en la expresión de proteínas implicadas en este proceso. Estas alteraciones fueron asociadas con un incremento en la expresión de transcritos que participan en biogénesis (Drosha), edición (Adar-1S) y estabilidad de miRNAs (Tut-4). Además, en los testículos de los animales expuestos detectamos por secuenciación masiva (NGS) 2 microRNAs sobre-expresados y 8 miRNAs disminuidos, estos datos fueron validados por qPCR, Junto con ello , se detecto por NGS 36 variantes de miRNAs (isomiRs) que presentaron cambios en sus niveles de expresión, siendo algunos de estos isomiRs, variantes de los miRNA canónicos alterados. Analizando las interacciones entre microRNAs/mRNAs se encontró que, la pérdida del control pos-transcripcional de miR-18a-5p hacia LxR-β estaría implicado en la sobreexpresión de Star, Cyp17a1 y en la disminución de Cyp19a1, lo cual serelaciona directamente con la disminución en la síntesis de estradiol que observamos en los animales expuestos.Peer reviewe