Efeito dos organoestânicos sobre a atividade transcricional de receptores nucleares, adipogênese e inflamação em células de mamíferos

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2016.Os organoestânicos são um grupo de compostos formados por um átomo de estanho ligado covalentemente a um ou mais grupamentos orgânicos. Dentre estes, o mais estudado é o cloreto de tributilestanho (TBT), um poluente ambiental com atividade desreguladora endócrina. No entanto, há poucos estudos com outros organoestânicos, como por exemplo, os dibutilestanho (DBT). O objetivo deste estudo foi investigar o efeito do diacetato, dicloreto, dilaurato e maleato de DBT sobre a atividade transcricional dos receptores nucleares PPARγ e RXRα e sobre a adipogênese e a inflamação em cultura de células de mamíferos. De forma semelhante ao cloreto de TBT, em ensaios de gene repórter, foi observado que o diacetato, o dicloreto, o dilaurato e o maleato de DBT são agonistas parciais do PPARγ. Ao contrário do cloreto de TBT, agonista total do RXRα, o dicloreto e o dilaurato de DBT são agonistas parciais do RXRα. Além disso, a introdução da mutação C285S, que impede a ligação do cloreto de TBT ao PPARγ, aboliu a atividade transcricional deste receptor induzida por todos os compostos, sugerindo que eles se ligam ao PPARγ de modo similar ao cloreto de TBT. Em pré-adipócitos 3T3-L1, todos os DBTs induziram a adipogênese via PPARγ, embora em menor intensidade que a rosiglitazona e o cloreto de TBT. Este efeito foi confirmado pela expressão dos marcadores adipogênicos Fabp4, Adipoq e Glut4. O co-tratamento das células 3T3-L1 com os DBTs e o T0070907, antagonista específico de PPARγ, reduziu o acúmulo lipídico, sugerindo que este efeito adipogênico ocorre via PPARγ. Além disso, o dicloreto, o dilaurato e o maleato de DBT reprimiram a expressão de genes associados à resposta inflamatória, tais como o Dcn, Fn1 e Vcam1, apesar desses efeitos terem sido menos intensos que o da rosiglitazona e do cloreto de TBT. De maneira interessante, em células RAW 264.7, apenas o cloreto de TBT e o dilaurato de DBT diminuíram a expressão de TNFα induzida por LPS. Esses achados mostram que o diacetato, o dicloreto, o dilaurato e o maleato de DBT são agonistas parciais do PPARγ. Ainda, o cloreto de TBT e os compostos de DBT induzem a adipogênese e reprimem genes associados à resposta inflamatória em cultura de células de mamíferos.Organotins is a group of different chemical compounds that have a tin atom covalently bound to one or more organic groups. The best studied organotin is tributyltin chloride (TBT chloride) which is environmental pollutant and an endocrine disruptor. However, there are few studies with other organotin compounds, such as dibutyltin (DBT). The aim of this study was to investigate the effect of DBTs diacetate, dichloride, dilaurate, and maleate on the transcriptional activity of the nuclear PPARγ and RXRα receptors, and on adipogenesis and inflammation in mammalian cell cultures. Analogous to TBT chloride, in reporter gene assay, it was observed that DBTs diacetate, dichloride, dilaurate, and maleate are partial agonists of PPARγ. Unlike TBT chloride, which is a full agonist of RXRα, DBTs dichloride, and dilaurate are partial RXRα agonists. Additionally, the introduction of the C285S mutation, which disrupts TBT chloride binding to PPARγ, abrogated the DBTs compounds transcription activity, suggesting that these compounds binds to PPARγ in the same binding pocket as TBT chloride. In preadipocytes 3T3-L1 cells, all DBTs induced adipogenesis in a PPARγ-dependent manner, although slighter than rosiglitazone and TBT chloride. This effect was confirmed by the expression of adipogenic markers such as Fabp4, Adipoq, and Glut4. Co-treatment of 3T3-L1 cells with DBTs and T0070907, a specific PPARγ antagonist, reduced fat accumulation, suggesting that this adipogenic effect occurs through PPARγ. Furthermore, DBTs dichloride, dilaurate, and maleate inhibited the expression of inflammatory response-related genes such as Dcn, Fn1, and Vcam1, even though these effects were weaker than rosiglitazone and TBT chloride. Interesting, in RAW 264.7 cells, TNFα expression induced by LPS was diminished only by TBT chloride and DBT dilaurate. These findings indicate that DBTs diacetate, dichlorate, dilaurate, and maleate are PPARγ partial agonists. Furthermore, TBT chloride and DBTs compounds induce adipogenesis and repress inflammatory response-related genes in mammalian cell cultures