Influencia de la suplementación del medio de maduración y de cultivo en la supervivencia a la criopreservación de embriones bovinos in vitro

Tesis (Maestría en Reproducción Bovina)--UNC- Facultad de Ciencias Agropecuarias ; Instituto de Reproducción Animal Córdoba, 2016.El objetivo de esta tesis fue evaluar la influencia de la suplementación del medio de maduración (MIV) y de cultivo (CIV) en la supervivencia a la criopreservación de embriones bovinos in vitro. En el experimento 1, se evaluó el efecto de la adición de Factor de Crecimiento Epidermal (EGF), en dos concentraciones, en el medio MIV sobre la supervivencia a la congelación convencional. Encontrándose que la adición de 50 ng/ml o 100 ng/ml, favoreció la maduración nuclear y no ejerció influencia sobre el desarrollo embrionario y la supervivencia de embriones congelados. En el experimento 2, se evaluó el efecto de la adición de Cisteamina en el medio de MIV sobre la supervivencia a la congelación. Observándose que la adición de 100 M favoreció la maduración nuclear y presentó una tendencia al aumento del porcentaje de embriones re – expandidos descongelados. En el experimento 3, se evaluó el efecto de la adición de 100 M de Cisteamina y de 100 ng/ml de EGF al medio MIV sobre la supervivencia a la congelación. Observándose que favoreció el desarrollo embrionario, pero no influyó en la supervivencia embrionaria. En el experimento 4, se evaluó el efecto en la supervivencia de embriones in vitro por la adición de Cisteamina en el medio de CIV en d3 y d5, encontrándose que la adición de 100 M en d5 favoreció la producción de embriones y al suplementar con 50 o 100 M en este mismo día, se favoreció la eclosión a las 72 hs., pero no influyó en el número de blastómeras. En el experimento 5, se evaluó el efecto en la supervivencia de embriones in vitro por la adición de ácido linoleico en el medio de CIV en d3 y d5. Observándose que suplementar con 50 M en d3, favoreció el clivaje y presentó una tendencia al aumento en el porcentaje de embriones y que la adición de 50 M en d5 favoreció la re-expansión de embriones descongelados. En el experimento 6, se evaluó el efecto en la supervivencia de embriones in vitro por la adición de fosfatidilcolina de soja en el medio de cultivo en los días 3 y 5, encontrándose que no influyó en el número de blastómeras, desarrollo embrionario y supervivencia a la congelación. En el experimento 7, se evaluó el efecto de la adición de Ácido linoleico, Cisteamina y lecitina en el medio de CIV en la supervivencia embrionaria a la congelación, encontrándose ningún efecto.The aim of this thesis was to evaluate the influence of supplementation IVM medium and CIV in cryopreservation survival of bovine embryos in vitro. In Experiment 1, the effect of the addition of EGF in the IVM medium on freezing survival finding that the addition of 50 ng/ml or 100 ng/ml, promotes nuclear maturation and no influence on embryo development and survival of frozen embryos. In experiment 2, the effect of adding Cysteamine in IVM medium was evaluated on survival frozen embryos, observed that the addition of 100 M promotes nuclear maturation and has a tendency to increase embryo re - expansion after thawed. In Experiment 3, the objective was study the effect of addition of cysteamine and EGF in IVM medium on frozen embryo survival and concluding that only embryo development improved and has no effect of embryo survival. In experiment 4, the goal was evaluate the in vitro embryo survival by the addition of cysteamine in IVC medium in d3 or d5, finding that the addition of 100 mM in d5 improved embryo production and with addition of 50 and 100 mM in the same day, improved hatching but has no influence in blastomeres numbers. In Experiment 5, the aim was study the effect of in vitro embryo survival by the addition of linoleic acid in IVC medium in d3 or d5, concluding that whit the supplementation with 50 mM in d3 stimulate embryos cleavage, presenting a tendency in embryo rates and the addition of 50 mM in d5 improve re-expansion on frozen embryos. In Experiment 6, the effect on survival of embryos in vitro by addition of soy phosphatidylcholine in the culture medium on days 3 and 5 were evaluated and found to not influence. In Experiment 7, the effect of the addition of linoleic acid, Cysteamine and lecithin in the culture medium has no effect in frozen embryo survival