Estudios genéticos de la biosíntesis de Poli(3-Hidroxibutirato)PHB, en Bacillus megaterium. Obtención y caracterización de mutantes y expresión heteróloga de genes phb

Los polihidroxialcanoatos (PHAs) constituyen una familia compleja de polímeros, que se acumulan en el citoplasma celular de una amplia variedad de microorganismos en forma de gránulos, como material de reserva. Estos polímeros pueden ser utilizados en la fabricación de plásticos que, a diferencia de los producidos por síntesis química son termoplásticos, biodegradables y pueden biosintetizarse a partir de recursos renovables. Bacillus megateríum acumula principalmente poli(3-hidroxibutirato), PHB, un homopolímero lineal de D(-)-3-hidroxibutirato. La estructura del gránulo, así como los mecanismos involucrados en su formación son poco conocidos. En este trabajo se obtuvo una colección de mutantes de Bacillus megaterium deficientes en la biosíntesis de PHA, con inactividad de la enzima PHA sintasa. A continuación, se estableció, un sistema de estudio de genes pha heterólogos en una bacteria que acumula el polímero en forma natural. Para ello se introdujo el gen que codifica para la enzima PHA sintasa de Alcaligenes eutrophus en las mutantes PHA negativas obtenidas, utilizando como vector de subclonado el plásmido “shuttle” pATl9. Por último y para contribuir al conocimiento sobre los roles de las proteínas asociadas al gránulo y sus interacciones en la formación del mismo, se aplicó este sistema de estudio al análisis de la interacción de la proteína de Mr 22 de B. megateríum, propuesta como un factor estructural de importancia en la formación de estas inclusiones, en B. megaterium, con gránulos sintetizados por la PHA sintasa de A. eutrophus. Los resultados obtenidos revelaron que esta proteína puede asociarse a los gránulos formados por la sintasa heteróloga