Uso y abuso de anti-inflamatorios no esteroides en deporte humano y equino : Establecimiento de un amplio screening en sangre y orina con análisis y detección por GC-MSD

Los anti-inflamatorios no esteroides (NSAIDs)son muy usados por los atletas para reducir la inflamación y el dolor. Si bien estas drogas no forman parte de la lista de substancias prohibidas por el Comité Olímpico Internacional (COI), la presencia de las mismas en las muestras de sangre y Orina de los deportistas puede en muchos casos resultar una interferencia en los screening para detectar el uso indebido de drogas. Por otro lado, estas drogas son también utilizadas en forma abusiva en medicina veterinaria, principalmente en competencias ecuestres y en este caso los organismos oficiales han prohibido su uso. Las metodologías hasta hoy descriptas son costosas y complejas y la falta de especificidad en la detección es una de las mayores limitaciones en la determinación de estas drogas en las muestras biológicas. En este trabajo de tesis, se ha desarrollado un screening rápido y especifico para la detección de los NSAIDs y/o de sus metabolitos. El método consiste en una extracción alquilativa seguida de Cromatografía Gaseosa con Detector de Masas (GC-MSD), por lo que presenta las siguientes ventajas: pequeño volumen de muestra; un único solvente de extracción; el proceso de clean up y derivatización se produce en un solo paso; alta sensibilidad; obtención rápida de datos y bajo costo. El análisis de los espectros de masas demostró que la técnica es sensible y específica como para poder identificar a un gran número de NSAIDs. Un análisis detallado de la fragmentación de las molécula fue de gran utilidad en la identificación de metabolitos de los cuales no existen los patrones comerciales y de los mismos derivados metilados de los NSAIDs. Este análisis se presenta en una de las secciones de este trabajo de tesis. Un standard interno fue incluido para evaluar la recuperación luego de la extracción y para calcular los tiempos de retención relativos. El valor promedio de la recuperación fue de un 83% lo que indicaría una buena extracción. El límite de detección es de 50 ng/ml y se observó una buena linearidad hasta un valor de 10 μg/ml. La Electroforesís Capilar se presenta también como técnica de screening alternativa, sin embargo como no se disponía de detector de masas no se la pudo desarrollar como screening confirmatorio. La extracción metilativa (EM) acoplada a GC- MSD resultó ser una técnica específica. eficiente y sensible para la detección de NSAIDs. El presente trabajo es sin duda una herramienta de gran utilidad para los laboratorios de control del doping