Estudio bioquímico y estructural de la quinasa de proteínas CK2 del hongo Candida Albicans y su participación en la fosforilación del proteasoma 20S homólogo : Clonado de la subunidad regulatoria (beta) de la enzima

Se investigó la Ae de la CK2 a lo largo del crecimiento del hongo Candida albicans, observándose que esta era máxima al comienzo de la fase logaritmica de crecimiento. La CK2 de células levaduriformes del hongo se purificó a aparente homogeneidad mediante un procedimiento que incluyó 4 cromatografias. La enzima mostró las características propias de las CK2 conocidas hasta el momento. En su forma nativa, presenta un PM aparente de 159 kDa. Esta compuesta por 4 polipéptidos diferentes; los polipéptidos de 39 y 37 kDa se identificaron como las subunidades catalíticas por experimentos de fosforilación in situ e inmunoreconocimiento. Los de 44 y 36 kDa fueron identificados como 2 subunidades regulatorias diferentes por autofosforilación e inmunoreconocimiento. Se estudió la fosforílación del proteasoma 20S de C. albicans por la CK2 homóloga, siendo esta totalmente dependiente de polilisina. Se identificó la subunidad mayoritariamente fosforilada como el componente α7/C8, por inmunoreconocimiento y secuenciación de un fragmento tríptico. Los resultados de este trabajo indican la existencia de más de un sitio de fosforilación en esta subunidad. Se logró el clonado del gen que codifica para la subunidad β de la CK2, obteniéndose un PM teórico para la proteína deducida de 33,7 kDa y un punto isoeléctico de 4,53. En al secuencia se encuentran presentes además de mayoria de los aminoácidos conservados en el resto de las subunidades regulatorias conocidas hasta el momento una inserción de 25 aminoácidos en la región central y una extensión hacia el extremo C-terminal