Secuencias repetidas en el genoma de Echinococcus granulosus : Su utilización para la detección del parásito y estudios de variabilidad genética

Para determinar las cepas del parásito existentes en nuestro país, se analizaron quistes hidatidicos provenientes de distintos huéspedes intermediarios y zonas geográficas, mediante el estudio de polimorfismo de longitud de fragmentos de restricción de un gen nuclear y la secuenciación de dos genes mitocondriales. Se detectó la presencia de cuatro cepas: oveja, oveja de Tasmania, camello y cerdo, determinándose además que las tres primeras pueden infectar al hombre. Se realizaron experimentos de Southern blot, utilizando TREG como sonda, para analizar la organización genómica, secuencia y número de copias de este elemento repetido en las cepas del parásito presentes en Argentina. EI patrón de bandas de restricción y la intensidad de señal observados en estos experimentos resultó claramente diferente para los dos grandes grupos de cepas presentes en nuestro país, el grupo oveja-oveja de Tasmania y el grupo camello-cerdo. Así mismo se observaron diferencias menores intra-cepa en algunos de estos patrones de restricción. Se determinó mediante experimentos de Southern blot que en el genoma de la cepa ovina hay 121 copias de una secuencia con por lo menos 85% de similitudcon TREG. Este valor es apreciablemente menor que el número de copias de TREG en el genoma de la cepa cerdo. TREG permitió la detección sensible y específica, mediante PCR, de todas las variantes genéticas encontradas en la Argentina. La técnica de PCR basada en la amplificación de TREG fue útil para detectar ADN parasitario extraído de heces caninas y para diferenciar heces de perros infectados con E. granulosus de perros infectados con T. hydatigena o no infectados con tenias. En conclusión, se ha aislado y caracterizado un elemento repetido en el genoma de E. granulosus con características de elemento satélite que pudo utilizarse tanto en la identificación del parásito como en la detección de sus cepas, así como también en la diferenciación de poblaciones pertenecientes a la misma cepa. La aplicación de un método diagnóstico en perros basado en la detección del elemento repetido de ADN aqui descripto y la descripción de las variantes genéticas del parásito en nuestro pais contribuyen significativamente a los estudios epidemiológicos y por lo tanto al mejoramiento de los programas de control de la hidatidosis. En este trabajo se demostró por primera vez la capacidad de las cepas oveja de Tasmania y camello para causar la hidatidosis en el hombre. Este hecho debería tenerse en cuenta para el estudio de la patología, el diseño de reactivos diagnósticos en humanos y la respuesta a vacunas profilácticasde esta enfermedad. Finalmente, los resultados obtenidos en esta tesis, en la que se ha demostrado diferencias importantes de cantidad, organización genómica y secuencia de un elemento repetido, refuerzan la idea que E. granulosus posee una plasticidad genómica de gran magnitud que se ve reflejada en las diferencias biológicas que presentan sus distintas variantes genéticas