Una nueva actividad citolítica en Antozoos : caracterización y significado biológico

En esta Tesis se presentan dos aspectos de la biología de los celenterados. Por un lado, se describe el hallazgo y la caracterización de la celenterolisina, una potente toxina citolítica encontrada en el celenterón del antozoo Phymactis clematis. Por otro lado. se presenta la elucidación del mecanismo de autotolerancia de la toxina, es decir, la forma en que la celenterolisina ataca a las células de otros organismos sin afectar los tejidos de la anémona. Se ha determinado que la celenterolisina es de naturaleza peptídica, con un peso molecular aproximado de 18.000. La actividad hemolítica de preparaciones de la misma purificadas por precipitación con sulfato de amonio, cromatografía de intercambio iónico y de filtración en Sephadex G-50, tiene un pH óptimo de 8, es termolábil, no es dependiente de Ca++ ni de Mg++, y es fuertemente inhibida por esfingomielina (SM) de diverso origen. La celenterolisina fue comparada con la hemolisina extraída de nematocistos purificados, determinándose que se trata de dos principios hemolíticos diferentes, que poseen además una distinta distribución en las partes del cuerpo de las anémonas. Los estudios del mecanismo de acción de la celenterolisina indicaron que su actividad no es debida a fosfolipasas, esfingomielinasas ni proteasas. El estudio de la hemólisis de glóbulos rojos con distinto contenido de SM indicó una mayor actividad hemolítica acompañando un mayor contenido de SM. Mediante experimentos en los que se utilizaron liposomas con carboxifluoresceína encapsulada, se halló que: i) la lisina posee una fuerte actividad lítica sobre los liposomas preparados con lípidos de eritrocitos bovinos, pero es completamente inactiva contra los liposomas de lípidos extraídos de las anémonas de mar; ii) si pequeñas cantidades de SM bovina (1% m/m) se agregan a los lípidos de la anémona, los correspondientes liposomas adquieren sensibilidad a la lisina, lo que no ocurre si en lugar de SM, se utiliza fosfatidilcolina u otros lípidos, señalando un rol crucial para la SM en el proceso. Una notable característica de los celenterados es la particular abundancia en sus membranas de análogosfosfónicos de la esfingomielina (SPnL), principalmente la ceramida aminoetil fosfonato. Significativamente, estos organismos no poseen la SM usualmente presente en otros metazoos. El significado de estas particularidades bioquímicas era hasta ahora desconocido. En este trabajo, he planteado la hipótesis de que las toxinas líticas y la composición lipídica son rasgos coadaptados que permiten a los celenterados destruir otros organismos, permaneciendo ellos mismos indemnes. Comprobando categóricamente esta hipótesis, se hicieron las siguientes observaciones originales: i) en contraste con la SM, los SPnL no inhiben la hemólisis causada por la celenterolisina; ii) la celenterolisina se une a los liposomas de SM pero no a los liposomas de SPnL. Es decir, estos hallazgos demuestran que la celenterolisina interactúa en forma muy diferente con estos dos análogos lipídicos casi indistinguibles. De este modo, el trabajo presentado en esta Tesis establece las bases para comprender de qué modo estos organismos pueden contener en sus cavidades gastrocélicas un poderoso agente lítico para otras células, siendo ellos resistentes al mismo. Celenterolisina y SPnL representan así los dos elementos de una adaptación no sospechada hasta el presente.Fil:Meinardi, Elsa Noemí. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina