Rol de las proteínas ribosomales P de Trypanosoma cruzi en lasgeneración de anticuerpos con autorreactividad funcional en la cardiomiopatía crónica chagásica

La cardiomiopatía crónica chagásica (CCCh) se caracteriza por su compleja sintomatología arritmogénica presentando diversos disturbios que incluyen arritmias ventriculares y disfunción de nódulo sinusal, cuya progresión puede llevar a la muerte súbita. Pese a que la CCCh es la resultante de un complejo número de factores, nuestro grupo ha demostrado que los anticuerpos que se generan contra las proteínas ribosomales P de T.cruzi en los pacientes podrían ejercer efectos patogénicos “no deseados” por reacción cruzada sobre el tejido cardíaco (estimulando los receptores β1-A y M2-Ch). En este trabajo demostramos la prevalencia de anticuerpos que reconocen receptores cardiovasculares en la CCCh y su correlación con la sintomatología arritmogénica de los pacientes. Investigamos el rol que desempeña la región C-terminal de la proteína ribosomal TcP2β,el péptido R13, en la generación de los anticuerpos que reaccionan en forma cruzada por un tanto con los receptores β1-A como con los receptores M2-Ch por un mecanismo de mimetismo molecular. Se demostró que los anticuerpos anti-R13 ejercen un efecto sobre la contractilidad de cardiomiocitos y sobre la cascada de señalización asociada a los receptores acoplados a proteína G. El estudio fino de los anticuerpos anti-R13 de diversos pacientes con CCCh y la caracterización de un anticuerpo monoclonal anti-R13 demostraron la heterogeneidad entre estos anticuerpos que fueron generados por un mismo antígeno pero con especificidad diferencial hacia los receptores cardíacos. El estudio de la especificidad de estos anticuerpos explicaría elementos de la compleja sintomatología en la CCCh. Finalmente, se construyó una biblioteca combinatorial de anticuerpos a partir de médula ósea de un paciente con CCCh y se identificaron anticuerpos recombinantes humanos anti-R13 que reproducen algunas de las características de los anticuerpos policlonales y el anticuerpo monoclonal. Esta biblioteca constituye una herramienta importante para comprender más profundamente los mecanismos moleculares implicados en la generación de anticuerpos con efectos cardíacos patogénicos y podrían permitir el diseño de estrategias terapéuticas para mejorar la calidad de vida del paciente con CCCh.Chronic Chagas' Heart Disease (cChHD) is characterized by a complex arrhythmogenic symptomatology, displaying various dísturbances including ventricular arrhythmias and sinus node dysfunction, leading in many cases to sudden death. Even if the pathogenesis of cChHD is the result of a multiple símultneaous events, our group demonstrated that cross-reactive antibodies raised against T.cruzi ribosomal P proteins could exert pathogenic effects on heart membranes (stimulating β1-adrenergic and M2-cholínergic receptors). In this work, we investigated the prevalence of antibodies that stimulate G protein coupled receptors (GPCR) and their clinical correlation with electrical disorders amongst patients with cChHD. We further investigated the role of the C-terminal region of TcP2β, peptide R13, in raising antibodies that cross react with both β1-adrenergic and M2-cholinergic receptors by a mechanism of molecular mimicry. The ability of anti-R13 antibodies to exert various effects on the contractility and signal transduction associated with GPCR in cardiomyocytes was demonstrated. The detailed studies on anti-R13 antibodies purified from different cChHD patients and the characterization of an anti-R13 monoclonal antibody provided further insight on the heterogeneous features of these antibodies that are generated against a common antigen but display differential specificity on cardiac receptors. The study of the fine specificity of anti-R13 antibodies allowed us to understand part of the complex symptomatology of cChHD. Finally, a combinatorial antibody library, made from bone marrow of a cChHD donor, was constructed. Anti-R13 recombinant human Fab fragments were identified and their properties compared to the observed features in the policlonal response and the murine monoclonal antibody. This library represents an important tool to gain further insight into the molecular mechanisms underlying the generation of cross-reactive antibodies with pathogenic effects on the human heart in cChHD and could provide some elements to design new therapeutic strategies.Fil:Mahler, Evelina Bárbara. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina