Human prepubertal testicular cells in culture: Madurative changes in steroidogenic regulation

La regulación de la fase postnatal temprana de activación testicular así como de la posterior quiescencia en humanos es poco conocida. Tanto la secreción de hormonas hipofisarias como la composición celular del testículo correspondiente a la fase postnatal temprana son diferentes al testículo adulto. El objetivo fundamental del presente trabajo de tesis fue desarrollar el cultivo primario de células testiculares humanas provenientes de necropsia. Se estudiaron 50 testículos de pacientes neonatales (grupo 1, G1), de la etapa de activación postnatal (G2), de la etapa de quiescencia testicular (G3) y puberales (G4). El estudio de la secreción de testosterona (T), marcador de células de Leydig, en función del tiempo post mortem (tpm) encontró que el tpm debe ser de hasta 24 horas, ya que a tpm mayores no hay T y se activa la enzima aromatasa. Se comparó la T basal y la respuesta a gonadotrofinas en los 4 grupos, hallándose que la T basal es significativamente mayor en G1 y G2 que en G3 (p<0.05) y que sólo GZ responde a gonadotrofinas. Se encontró que Ia actividad estimada de las enzimas 17β-HSD, 3β-HSD y 17,20 liasa de la P450c17, fue significativamente mayor en G2 que en G3 y que 17β-HSD y 3β-HSD están más activas que 17,20 liasa. Por análisis con precursores tritiados de las vias Δ4 y Δ5 e identificación de metabolitos producidos por cromatografía en capa delgada se observó que la vía Δ5 es preferencial en testículo humano prepúber. Se observó un aumento de T en ausencia de gonadotrofinas bajo GH en G2 y bajo IGF-1 en los 4 G. Se estudió la secreción de inhibina-B, marcador de célula de Sertoli, encontrándose una disminución con la edad durante la prepubertad, un aumento en paralelo a la T y un efecto estimulador de FSH. Por el método de subcultivos y criopreservación de células testiculares humanas de necropsia, se encontró T, bajo colesterol ó pregnenolona, indicando que las enzimas esteroidogénicas están preservadas. El modelo experimental desarrollado ha demostrado además ser útil para estudiar la fisiopatogenia de diversas alteraciones de la función testicular en los niños.The regulation of the ear1y postnatal activation and subsequent quiescence in human testicular development is poorly understood. The secretion of pituitary hormones and the testicular cell composition in prepubertal are different than adult men. The main aim of this study was to develop the primary culture of human testicular cells obtained from necropsy. A total of fifty testes was studied and divided into: neonatal stage or group 1 (G1), postnatal activation stage (G2), stage of quiescence (G3) and pubertal stage (G4). Testosterone secretion (T), as marker of Leydig cell function, was related with post mortem hours (pmh). It was found that pmh must be less than 24 hours, because at pmh a higher T dissapeared and aromatase activity increased. Basal T and response to gonadotrophins were analyzed in the 4 groups. Basal T was significantly higher in G1 and G2 than in G3 (p