Studio della regolazione del gene MSLN nel Mesotelioma Pleurico Maligno

La mesotelina (MSLN) è una glicoproteina di 40 kDa ancorata alla membrana cellulare mediante una coda di glicosil fosfatidilinositolo (GPI) e debolmente espressa nei tessuti mesoteliali adulti. Numerosi studi sulla sua struttura hanno rivelato che essa deriva da un precursore di 71 kDa costituito da 622 aminoacidi che viene tagliato in corrispondenza di un residuo di arginina in posizione 295. Il restante peptide di 31kDa viene denominato MPF (“megakaryocyte proliferation factor”). Esiste anche una forma solubile ddi MSLN che manca della porzione che si complessa al GPI ed è chiamata SMRP o “soluble mesothelin related peptides”. MSLN è sovraespressa in gran parte dei casi di mesotelioma pleurico maligno (MPM), di adenocarcinoma pancreatico, di tumore ovarico e nel 50% dei casi di adenocarcinoma polmonare. La sua forma solubile è attualmente considerata uno dei marcatori diagnostici più promettenti per il MPM. Infatti pazienti con MPM presentano elevati livelli sierici di SMRP, rispetto a individui affetti da altre forme neoplasiche e controlli sani. A seguito di molte indagini, è stato osservato che numerosi fattori clinici e demografici (ad esempio il peso, l’indice di massa corporea e il coefficiente di filtrazione glomerulare) possono influenzare i livelli di SMRP in individui sani, limitando la sua specificità come biomarcatore. Inoltre, anche fattori genetici quali polimorfismi a singolo nucleotide (SNPs) possono alterare i livelli sierici di SMRP in soggetti sani. Il presente progetto ha lo scopo di analizzare alcuni aspetti della regolazione del gene MSLN sia in un contesto non maligno che in cellule di MPM. E’ stato effettuato uno studio di associazione tra SNPs localizzati a livello del promotore del gene MSLN e i livelli di SMRP serica su un’ampia casistica di individui ex-esposti all’amianto. Un’associazione significativa è stata trovata tra l’allele variante di alcuni SNPs ed incrementati livelli di SMRP in individui non affetti da MPM. Uno studio in vitro è stato condotto al fine di valutare l’effettivo ruolo biologico dei polimorfismi associati. Una sequenza di circa 1000 bp del promotore del gene MSLN è stata clonata a monte di un gene reporter e mutagenizzata per la costruzione dei quattro aplotipi rappresentativi della popolazione. Cellule di mesotelio sano immortalizzato sono state trasfettate con i quattro costrutti per indagare la relazione tra aplotipi e livello trascrizionale di MSLN. Inoltre, per l’analisi di MSLN come promotore della cancerogenesi è stato utilizzato un modello in vitro che avesse un incremento di MSLN tempo-dipendente. L’espressione di MSLN in una linea cellulare di MPM è stata analizzata a intervalli di 24 h per una settimana. A seguito di un esito positivo di queste analisi, lo studio si è incentrato sulla ricerca di un promotore minimo di MSLN che possa permettere uno studio più approfondito del meccanismo molecolare e dei pathway genetici che coinvolgono MSLN nella progressione del MPM