Effetto su alcune caratteristiche spermatiche del congelamento del seme canino in diluenti con diverse concentrazioni di Trolox?

Il seme congelato può essere conservato per un tempo potenzialmente indefinito, ma questa tecnica presenta alcuni svantaggi, come la riduzione della capacità di fertilizzare degli spermatozoi, dovuta in parte all’aumento dei livelli delle Specie Reattive dell’Ossigeno (ROS). Questi composti danneggiano le membrane, le proteine, ed il DNA degli spermatozoi ed un loro aumento è correlato con una diminuzione della motilità. Lo scopo di questa tesi è stato quello di verificare se l’aggiunta al diluente per il congelamento del seme dall’antiossidante Trolox® (un analogo idrosolubile del tocoferolo), potesse mantenere meglio motilità ed integrità della membrana plasmatica. Il seme di 9 cani è stato congelato in due step in diluenti a base di Tris, citrato e fruttosio con una concentrazione finale del 5% di glicerolo e dello 0,5% di Equex STM paste (CONTR) a cui sono stati aggiunte 100, 200 o 400 µM di Trolox®, T100, T200 e T400 rispettivamente. Dopo conservazione in azoto liquido per almeno 1 settimana le paillettes sono state scongelate e valutate dopo 0, 1, 2 e 3 ore di incubazione a 37°C con Comuputer Assisted Sperm Analyzer; mentre l’integrità di membrana (HOS-test) è stata valutata 0 e 2 ore dopo scongelamento. All’ora 0 e all’ora 1 non vi era alcuna differenza tra i trattamenti, mentre all’ora 2 e all’ora 3 T400 aveva motilità totale, progressiva e rapida inferiore al CONTR. Anche la percentuale di spermatozoi con membrana plasmatica integra non differiva mai significativamente tra i gruppi. In conclusione, l’aggiunta di Trolox® alle concentrazioni di 100, 200 µM non ha migliorato le caratteristiche del seme canino post-congelamento, mentre 400 µM ne hanno peggiorate la motilità. Abstract Keywords: dog; semen; cryopreservation; motility; Trolox. Frozen semen can be preserved for a potentially indefinite time, but this technique has some disadvantages, such as the reduction of the sperm cells fertilizing ability, partially due to the increased levels of Reactive Oxygen Species (ROS). These compounds cause a damage to spermatozoal membranes, proteins and DNA, and their increase is related to a reduction of motility. The aim of this thesis was to evaluate if the addition to the freezing extender of antioxidants, Trolox® (a water-soluble tocopherol analogue), would better preserve motility, plasma membrane integrity. Semen of 9 dogs was frozen in two steps in a Tris, citrate and fructose extender with a final concentration of 5% glycerol and 0.5% Equex STM paste (CONTR) to which added100, 200 or 400 µM Trolox® (TROL), T100, T200 and T400 respectively. After preservation in liquid nitrogen for at least one week, straws were thawed and evaluated after 0, 1, 2 and 3 hours of incubation at 37°C with a Computer Assisted Sperm Analyser; while plasma membrane integrity (HOS-test) were evaluated after post-thaw ,at hour 0 and hour 2. There was no difference between treatments at hour 0 and 1, while hour 2 and hour 3 T400 had total motility, progressive and rapid less than the CONTR. The proportion of intact plasma membranes was also never significantly different between groups. In conclusion, the addition of Trolox® at concentrations of 100, 200 µM did not improve the characteristics of the seed canine post-freezing, while 400 µM have worsened motility