Confronto tra la tecnica colturale standard e la PCR real-time quantitativa per la identificazione di Legionella pneumophila in campioni di acqua di circuito ospedaliero

INTRODUZIONE: Legionella è un batterio ubiquitario negli ambienti acquosi. In Europa, circa il 90% delle infezioni causate da questo batterio sono dovute a L. pneumophila con sierogruppo di tipo 1. Il metodo standard utilizzato per la sorveglianza ambientale è la tecnica colturale, sebbene il metodo basato sulla PCR Real-time PCR rappresenti un’attraente alternativa. L’obiettivo di questo studio è l’identificazione del valore soglia, calcolato con la PCR Real-time, che rifletta la maggior concordanza con i valori della tecnica convenzionale microbiologica. MATERIALI E METODI: Dal 2011 al 2013, 77 campioni di acqua sono stati raccolti in bottiglie sterili, contenenti sodio tiosolfato allo 0.01% per neutralizzare i residui di Cloro, e trasportati a temperatura controllata ai laboratori per le successive analisi. Il DNA di L. pneumophila è stato estratto e poi quantificato mediante PCR Real-time utilizzando il kit iQ-Check Screen L. pneumophila (Biorad). RISULTATI: Venti campioni (26%) su 77 analizzati sono risultati positivi alla metodica standard colturale. Le concentrazioni di L. pneumophila, determinate tramite PCR come GU/l, sono risultate maggiori di quelle espresse in CFU/l in 56 campioni (73%), minori in 1 solo campione (1%), ed uguali in 20 campioni (26%). E’ stata riportata una significativa correlazione tra le metodiche (ρ=0.52). CONCLUSIONI: L’elevata sensibilità e il valore predittivo negativo rilevati, rendono la PCR Real-time un metodo di screening ideale per identificare e quantificare L. pneumophila in campioni ambientali di acqua. Se confrontata con i metodi colturali ha il vantaggio di fornire i risultati in meno di 3 ore dopo i passaggi di filtrazione dell’acqua ed estrazione del DNA. La PCR Real-time rappresenta quindi un’interessante tecnica complementare al metodo colturale standard