Desenvolvimento de um imunossensor para detecção de troponina cardíaca utilizando nanopartículas de ouro e nanoplaquetas de grafite

TCC (graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Físicas e Matemáticas. Curso de Química.A troponina cardíaca T (TnT) faz parte de um complexo de três proteínas (I, C e T) envolvidas no processo de contração dos músculos esquelético e cardíaco. Quando há lesão cardíaca a TnT é liberada na corrente sanguínea, sendo considerada um biomarcador para auxílio na identificação de infarto agudo do miocárdio (IAM). Neste trabalho, um imunossensor foi desenvolvido com objetivo de detectar TnT em plasma sanguíneo a partir da modificação da superfície de um eletrodo de carbono vítreo com filme de nanopartículas de ouro estabilizadas em heparina (AuNP-Hep) contendo nanoplaquetas de grafite (xGnP), anticorpo (ab-TnT) e Nafion. Solução de hidroquinona (3,0x10-4 mol L-1) foi utilizada como sonda redox e solução tampão fosfato salino (0,01 mol L-1, pH 7,4) como eletrólito de suporte. A técnica selecionada foi a voltametria de pulso diferencial, os parâmetros voltamétricos foram investigados e as melhores respostas foram obtidas utilizando 2 mV de incremento, 100 mV de amplitude e 40 ms de intervalo de tempo. O melhor desempenho do imunossensor foi obtido usando 1 mg de xGnP, 200 μL de AuNP-Hep e 20 μL de ab-TnT. A melhor resposta do imunossensor foi obtida com tempo de imobilização de 15 min do anticorpo e tempo de incubação de 20 min para o antígeno (amostra). Após otimização dos parâmetros experimentais, a curva de calibração foi obtida com concentrações crescentes deste biomarcador cardíaco de 0,05 a 0,35 ng mL-1 e limite de detecção de 0,016 ng mL-1, utilizando a voltametria de pulso diferencial. Esse imunossensor foi usado com sucesso na determinação de TnT em amostra simulada de plasma humano, e apresentou erro aceitável de 6,7%. Compostos presentes em amostra de plasma foram investigados como potenciais interferentes sobre a resposta do imunossensor, e como resultado observou-se baixo nível de interferência (inferior a 12%). Indivíduos saudáveis possuem nível sanguíneo de TnT inferior a 0,01 ng mL-1 e o teor de 0,3 ng mL-1 foi estabelecido como critério para o diagnóstico do IAM. Diante dos resultados obtidos, conclui-se que o imunossensor proposto é capaz de detectar níveis clínicos aceitáveis para TnT, mostrando-se uma ferramenta útil para o diagnóstico precoce, apresentando baixo tempo de análise (20 min) e fácil construção